细胞生物学件.ppt

在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器,速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀第31页,共54页，星期六，2024年，5月A：速度沉降B：等密度沉降第32页,共54页，星期六，2024年，5月二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法原理：利用一些显色剂与所检测物质中一些 特殊基团特异性结合的特征，通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布与含量。第33页,共54页，星期六，2024年，5月Feulgen反应→DNA苏丹Ⅲ→脂类第34页,共54页，星期六，2024年，5月酶的显示是通过显示酶的活性来表明酶的存在，而不是酶的本身。将具有酶活性的组织放入含有一定底物的溶液中孵育，底物经酶的作用形成初级反应产物，它再与某种捕捉剂相反应,形成显微镜下可视性沉淀,即最终反应产物。如：细胞内酸性磷酸酶的显示先将切片放入含有酶底物(常用β-甘油磷酸钠)的溶液中孵育，底物经酶的作用，水解并释放出磷酸；用捕捉剂硝酸铅与磷酸反应，形成微细的磷酸铅沉淀，此时，可在电镜下检出；如再用硫化铵处理时，磷酸铅被置换成硫化铅沉淀，可在光镜下见到。第35页,共54页，星期六，2024年，5月ABA:细胞色素氧化酶活性定位B:ATP酶活性定位第36页,共54页，星期六，2024年，5月三、特异蛋白抗原的定位与定性一般说来，发生在组织细胞内的抗原抗体反应是不可见的，但如果事先将某种荧光素、酶、同位素等用生化方法标记在抗体分子上（标记抗体），就能凭借特殊光镜及电镜等观察标本中的荧光现象、酶作用的沉淀物（颜色）、放射线径迹的有无和部位，由此判断是否发生了特异性的抗原抗体反应以及抗原物质的定位分布。第37页,共54页，星期六，2024年，5月四、细胞内特异核酸的定位与定性原位杂交：用标记的核酸探针通过分子杂交确定特异核苷酸序列在染色体上或在细胞中的位置的方法。在显微与亚显微水平上的基因定位、特异mRNA表达等研究中起重要作用。光镜水平的原位杂交技术（同位素标记或荧光素标记探针） 电镜水平的原位杂交技术（生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合）第38页,共54页，星期六，2024年，5月人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交照片第39页,共54页，星期六，2024年，5月五、放射自显影技术原理及应用：?利用同位素的放射自显影，对细胞内生物大分子进行定性、定位与定量研究；?实现对细胞内生物大分子进行动态和追踪研究。第40页,共54页，星期六，2024年，5月a：疏松染色质处的RNA转录b：骨髓细胞高尔基复合体处的硫酸酯（箭头处）第41页,共54页，星期六，2024年，5月六、定量细胞化学分析技术

细胞显微分光光度术?利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收，测定这些物质如（核酸与蛋白质等）在细胞内的含量。 第42页,共54页，星期六，2024年，5月流式细胞术：指用流式细胞仪（FCM）对细胞或染色体进行分选或对单个细胞或其它生物微粒进行定量分析的一门技术。主要应用：用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量； 测定细胞群体中不同时相细胞的数量； 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞； 分离特异染色的染色体。第43页,共54页，星期六，2024年，5月※细胞分选荧光标记抗体探针＋细胞抗原细胞被标记除去游离抗体稀释超声波振荡器内与鞘液混合液滴被激普通细胞：干涉检测器检测光激发荧光标记：干涉检测器＋细胞荧光检测器检测鞘液带上正电荷负极收集器鞘液带上负电荷正极收集器※染色体分选同理。用荧光标记的DNA探针同特异染色体结合，使待分选的染色体带上荧光标记。第44页,共54页，星期六，2024年，5月用流式细胞计分选细胞示意图第45页,共54页，星期六，2