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协和医院环境卫生学监测方法及要求

一、采样和检查原则

1、采样后应尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h;若样品保存于0℃～4

2、不推荐医院常规开展灭菌物品的无菌检查，当流行病学调查怀疑医院感染事件与灭菌物品有关时，进行相应物品的无菌检查。常规监督检查可不进行致病性微生物检测，涉及疑似医院感染暴发调查或工作中怀疑微生物污染时，应进行目标微生物的检测。

3、可使用经验证的现场快速检测仪器进行环境、物体表面等微生物污染情况和医疗器材清洁度的监督筛查；也可用于医院清洗效果检查和清洗程序的评价和验证。

二、空气微生物污染检查方法

1、采样时间

Ⅰ类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境在消毒或规定的通风换气后从事医疗活动前采样。

2、检测方法

①Ⅰ类环境可选择平板暴露法和空气采样器法，参照GB50333《医院洁净手术部建筑技术规范》要求进行检测。空气采样器法可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。检测时将采样器置于室内中央0.8m～1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。房间大于10m2者，每增加10m

②Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境采用平板暴露法。室内面积≤30m2，设内、中、外对角线3点，内、外点应距墙壁1m处；室内面积＞30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位应距墙壁1m处。将普通营养琼脂平皿（Φ90mm）放置各采样点，采样高度为距地面0.8m～1.5m；采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间（Ⅱ类环境暴露15min、Ⅲ、

③将送检平皿置36℃±1

三、物体表面微生物污染检查方法

1、采样时间

潜在污染区\污染区消毒后采样.清洁区根据现场情况确定。

2、采样面积

被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。

3、采样方法

用5cm×5cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1～4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。

四、医务人员手卫生检查方法

1、采样时间

采取手卫生后，在接触病人或从事医疗活动前采样。

2、采样方法

将浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米（cm2）计算。若采样

五、医疗器材检查方法

1、采样时间

在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。

2、灭菌医疗器材的检查方法

①可用破坏性方法取样的，如一次性输液（血）器、注射器和注射针等按照《中华人民共和国药典》中“无菌检查法”进行。对不能用破坏性方法取样的医疗器材，应在环境洁净度1000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹，采样取全部表面或不少于100cm2，然后将除去手接触部分的

②牙科手机：应在环境洁净度1000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，将每支手机分别置于含20mL～25mL采样液的无菌大试管（内径25mm）中，液面高度应大于4.0cm,于漩涡混合器上洗涤振荡30s以上，取洗脱液进行无菌检查。

3、消毒医疗器材的检查方法

①可整件放入无菌试管的，用洗脱液浸没后振荡30s以上，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL，36℃±1

②可用破坏性方法取样的，在100级超净工作台称取1g～10g样品，放入装有10mL采样液的试管内进行洗脱，取洗脱液1.0mL接种平皿，计数菌落数（CFU/g），必要时分离致病性微生物。对不能用破坏性方法取样的医疗器材，在100级超净工作台，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2，然后将除去手接触部分的棉拭子进行洗脱，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL，36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数（CFU/

③消毒后内镜：取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50mL含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集（可使用蠕动泵）送检。将洗脱液充分混匀，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾