干细胞的诱导分化方法及各类诱导试剂的配置.docx

干细胞诱导分化的方法及各类诱导试剂的配置YAOXiang

由于易分离获得、免疫原性低且具有多向诱导分化潜能，骨髓基质干细胞（Bonemarrowstromastemcells，MSCs）成为了组织工程与再生医学中理想的种子细胞。正是由于上述原因，骨髓基质干细胞成为了很多研究者关注并使用的模型细胞。

本文将着重于骨髓基质干细胞的成骨诱导分化、成软骨诱导分化和成脂诱导分化三个方向加以介绍，相关内容有利于实验研究者快速而有效地配制上述各类诱导分化试剂，进而极大缩短前期探索实验和文献搜索整合所耗费的大量时间。本文主要内容涵盖：

1.成骨诱导分化中诱导液的添加方案（包含换液周期及诱导试剂浓度）

2.成骨诱导分化中各类诱导试剂的产品信息及母液配置方案

3.成脂诱导分化中诱导液的添加方案（包含换液周期及诱导试剂浓度）

4.成脂诱导分化中各类诱导试剂的产品信息及母液配置方案

5.成骨与成脂共诱导液的添加方案（包含换液周期及诱导试剂浓度）

6.成骨与成脂共诱导试剂的产品信息及母液配置方案

7.成软骨诱导分化中诱导液的添加方案（包含换液周期及诱导试剂浓度）

8.成软骨诱导分化中各类诱导试剂的产品信息及母液配置方案

注：下述诱导方案经多次实验验证是行之有效的，笔者利用相关方案参与发表的部分参考文献如下：

1.YaoX,PengR,DingJD*.Cell-materialinteractionsrevealedviamaterialtechniquesofsurfacepatterning.AdvancedMaterials,2013;25:5257-86.(材料领域TOP期刊)

2.YaoX,HuYW,CaoB,PengR,DingJD*.Effectsofsurfacemolecularchiralityonadhesionanddifferentiationofstemcells.Biomaterials,2013;34:9001-9.(生物材料领域TOP期刊)

3.YaoX,PengR,DingJD*.Effectsofaspectratiosofstemcellsonlineagecommitmentswithandwithoutinductionmedia.Biomaterials,2013;34:930-9.

4.PengR,YaoX,CaoB,TangJ,DingJD*.Theeffectofcultureconditionsontheadipogenicandosteogenicinductionsofmesenchymalstemcellsonmicropatternedsurfaces.Biomaterials,2012;33:6008-19.(IF:8.39)

5.PengR,YaoX,DingJD*.Effectofcellanisotropyondifferentiationofstemcellsonmicropatternedsurfacesthroughthecontrolledsinglecelladhesion.Biomaterials,2011;32:8048-57.

首先需要说明的是骨髓基质干细胞正常传代培养所需的培养基为“基础培养液”，一般2-3天更换一次新的培养液。基础培养液是基于低糖的DMEM（DulbeccosmodifiedEaglemedium，后文均以简写的DMEM替代）所配置，其中含有100U/ml的青霉素，100μg/ml的链霉素，2mM的L-谷氨酰胺和10%的胎牛血清（Bovineserumalbumin，FBS）。上述试剂全为Gibco品牌（下述诱导液中也需用到这些试剂，直接购买使用即可）。

一．成骨诱导分化中诱导液的添加方案（包含换液周期及诱导试剂浓度）

对于单独的成骨诱导，干细胞需在“成骨诱导液中”中连续培养，采用每3天更换一次新诱导液的方案进行。就总的时间跨度来说，一般短的1周，长的3-4周都有，具体时间跨度需要依据你的实验目的而定。

成骨诱导液是基于高糖的DMEM（含100U/ml的青霉素，100μg/ml的链霉素，2mM的L-谷氨酰胺）所配置，其中含有10%的FBS（胎牛血清）、50μM的抗坏血酸、10mM的β-甘油磷酸钠和1