基因工程一轮复习.pptVIP

;概念分析;基因工程诞生的理论根底分析：

1．基因拼接的理论根底

双链DNA分子的空间结构都是规那么的双螺旋结构。;2.基因工程的根本工具

(1)“分子手术刀”——__________

①来源：主要是从__________中别离纯化出来的。

②功能：能够识别双链DNA分子的某种__________的核苷酸序列，并且使每一条链中__________部位的两个核苷酸之间的__________断开，因此具有__________性。

③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：__________和__________。;(2)“分子缝合针”——__________

①两种DNA连接酶〔E?coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶〕的比较：

a.相同点：都缝合__________键。

b.区别：E?coliDNA连接酶来源于__________，只能将双链DNA片段互补的__________之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合__________，但连接平末端之间的磷酸二酯键效率较__________。

②与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将__________加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键〔DNA复制时〕。DNA连接酶是连接__________的末端，形成磷酸二酯键〔基因工程中〕。;〔3〕另外还介绍几种酶

①解旋酶：在DNA复制或转录时破坏DNA碱基对间的氢键，从而将双螺旋翻开。

②DNA水解酶：催化DNA水解。

③RNA聚合酶：在转录时将单个的核糖核苷酸连接成RNA单链。;(3)“分子运输车”——__________

使用运载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制〔称为克隆〕。

①运载体具备的条件

a.能在受体细胞中复制并稳定保存。

b.具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

c.具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

②最常用的运载体是__________,它是一种裸露的、结构简单的、独立于__________核区DNA之外，并具有__________的双链__________DNA分子。

③其他运载体：__________、__________。;;(3)PCR技术扩增目的基因

①原理：__________。

②过程

第一步：加热至90～95℃__________；

第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；

第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。;(3)PCR技术与DNA复制的比较;;①启动子：是一段有特殊结构的__________，位于基因的__________，是__________识别和结合的部位，能驱动基因转录出__________，最终获得所需的__________。

②终止子：也是一段有特殊结构的__________，位于基因的__________。

③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是__________。;;3.将目的基因导入受体细胞

(1)转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。;4.目的基因的检测与鉴定

(1)首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用________________________________________。

(2)其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用_____________________________________。

(3)最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行_________。

(4)有时还需进行______________的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。;;;一、基因诊断与基因治疗;2.基因治疗

(1)原理：把正常的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，到达治疗疾病的目的。病人细胞中既有缺陷基因，也有正常基因。

(2)方法：体外基因治疗和体内基因治疗。

(3)体外基因治疗：先从病人体内获得某种相关细胞，进行培养，然后在体外完成基因转移，再筛选成功转移的细胞扩增培养，最后重新输入患者体内，这种方法叫做体外基因治疗。

(4)体内基因治疗：直接向人体组织细胞中转移基因的治疗方法叫做体内基因治疗。

举例：基因治疗的过程〔以镰刀型细胞贫血症的治疗为例〕;举例：基因治疗的过程〔以镰刀型细胞贫血症的治疗为例〕;说明：对于遗传病的治疗，最根本的方法是进行基因替换或修复。基因治疗的最正确时期理论上是受精卵时期，这样可以使个体的每个细胞都含有正常基因，但在现实生活中是不可能的，因为不可能人人都在受精卵时期进行基因检查。其次