离子交换层析课件课件.ppt

3.反离子的选择离子交换剂处于电中性时往往带有一定的反离子。为了提高交换容量，一般应选择结合力较小的反离子。所此，强阳性和强阴性离子交换剂应分别选择H型和OH型；弱酸性和弱碱性离子交换剂应分别选择Na型和Cl型。4.基质的选择树脂基质是疏水性化合物，而纤维素、葡聚糖和琼脂糖基质则是亲水性化合物。在分离生物大分子时，亲水性基质交换容量高，且对生物大分子物质的吸附和洗脱都比较温和，被分离物质活性不易受到破坏。要恰当地选择离子交换剂，必须对被分离物的性质和所处溶液组分及酸碱度等因素进行全面分析。综合考虑上述4个方面，选择的离子交换剂才能成功地分离样品。第32页,共46页，星期六，2024年，5月三、操作1.离子交换剂的处理、再生和转型取适量的固体离子交换剂先用水浸泡，待充分膨胀后加大量的水悬浮除去细颗粒，尔后改用酸碱浸泡，以便除去杂质和使其带上需要的反离子。疏水性离子交换剂可以用2-4倍的2mol/LNaOH或2mol/LHCl溶液处理；而亲水性离子交换剂则只能用0.5mol/LNaOH和0.5mol/LNaCl混合溶液或0.5mol/LHCl处理(室温下处理30分钟)。酸碱处理的次序决定了离子交换剂携带反离子的类型。在每次用酸(或碱)处理后，均应先用水洗涤至近中性，再用碱(或酸)处理。末了用水洗涤至中性，经缓冲液平衡后即可使用或装柱。第33页,共46页，星期六，2024年，5月使用过的离子交换剂，可采用一定的方法使其恢复原来的性状，这一过程叫做再生。再生可以通过上述的酸、碱反复处理完成，但有时也可以通过转型处理完成。所谓转型是指离子交换剂由一种反离子转为另一种反离子的过程。比如，欲使阳离子交换剂转成钠型时，则需用NaOH处理；欲使其转成氢型时，则需用HCl处理；欲使其带铵离子时，则需用NH4OH或NH4Cl处理。长期使用过的树脂含有很多杂质，欲将其除掉，应先用沸水处理，然后用酸、碱处理。用热的稀酸、稀碱处理效果更好。树脂若含有脂溶性杂质时，可用乙醇或丙酮处理。而长期使用过的亲水性离子交换剂的处理一般只用酸、碱浸泡即可。原则上讲，去除杂质的过程应在不破坏离子交换剂的结构和稳定性，不影响其原有交换容量的前提下进行。第34页,共46页，星期六，2024年，5月2.缓冲液的选择离子交换剂不仅可以与被分离物进行交换，而且还可以与缓冲液中的离子进行交换。因此，离子交换剂吸附被分离物的量与缓冲液的pH值和离子浓度有密切关系。起始缓冲液pH值和离子强度要能使样品中有效成分与离子交换剂结合，而杂质与交换剂不结合，则pH值一般比有效成分的pI高一个单位(用阴离子交换剂)或低一个单位(用阳离子交换剂)，离子强度为0.1时，就可很快地把有效成分与杂质分开。或者选择起始缓冲液的离子强度和pH值，使有效成分与离子交换剂结合得不牢固，而杂质与离子交换剂结合得牢固，也能得到高纯度有效成分。选用的洗脱液，其离子强度和pH值应使有效成分从离子交换剂上解离下来，一般离子强度要比起始缓冲液高，pH值要按离子交换剂性质来选择。第35页,共46页，星期六，2024年，5月3.被分离物质的交换使用离子交换剂的方法有两种：一种是柱层析法，也叫动态法，即将离子交换剂装入层析柱内，让溶液连续通过。该法交换效率高，应用范围广；另一种是分批法，也叫静态法，即将离子交换剂置入盛溶液的容器内缓慢地搅拌。该法交换率低，不能连续进行，但是，需要的设备简单，操作容易。柱层析法装柱的操作和要求与吸附柱层析相同。离子交换剂的总用量要依据其交换容量和待吸附物质的总量(包括连续使用的全部量)来计算。当溶液含有各种杂质时，必须考虑使交换量留有充分余地，实际交换量只能按理论交换量的25%-50%计算。在样品纯度极低，或有效成分与杂质的性质相似时，则实际交换量应控制得更低些。层析柱高与直径比例一般要大于10∶1，分离样品的成分复杂时，比例宜高一些，用于样品浓缩和脱盐时，比例可低一些。第36页,共46页，星期六，2024年，5月4.被分离物质的洗脱与收集在离子交换层析过程中，常用梯度溶液进行洗脱，而溶液的梯度则是由盐浓度或酸碱度的变化形成的。梯度溶液按组成来分，一般有二种：一种是增加离子强度的梯度溶液。是用一简单的盐(如NaCl或KCl)溶解于稀缓冲液制成的，习惯上不用弱酸或弱碱的盐类；另一种是改变pH值的梯度溶液。该溶液是用两种不同pH值或不同缓冲容量的缓冲液制成的，所用缓冲液的种类、pH值以及缓冲容量要认真选择，否则将达不到预期目的。对于增加离子强度的梯度溶液，不管用于何种类型的离子交换剂，其离子强