原创力文档- 1、本文档共4页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
Car-T细胞培养标准操作流程
一、制定目的及范围
Car-T细胞疗法作为一种新兴的免疫治疗手段，已在多种恶性肿瘤的治疗中展现出良好的效果。为了确保Car-T细胞的培养过程规范化、标准化，特制定本操作流程。该流程适用于Car-T细胞的培养、扩增及质量控制，涵盖从细胞采集到最终细胞制备的各个环节。
二、培养原则
1.细胞培养必须在无菌环境下进行，确保细胞的活性和功能。
2.所有操作应遵循生物安全和实验室安全规范，确保操作人员和环境的安全。
3.细胞培养所用的试剂和耗材必须经过严格的质量控制，确保其适用性和有效性。
4.细胞培养过程中的每一步都应记录详细，以便追溯和质量控制。
三、Car-T细胞培养流程
1.细胞采集
1.1患者准备：在进行细胞采集前，需对患者进行充分的评估，确保其符合细胞治疗的适应症。
1.2采集方式：采用外周血单采技术，使用合适的抗凝剂（如EDTA）进行血液采集。
1.3细胞分离：使用密度梯度离心法分离外周血单核细胞（PBMC），收集上层液体并洗涤细胞。
2.细胞激活
2.1细胞计数：使用细胞计数板或自动细胞计数仪对分离的PBMC进行计数，确保细胞浓度适宜。
2.2激活试剂准备：根据实验设计，准备CD3/CD28抗体珠或其他激活试剂。
2.3激活过程：将PBMC与激活试剂混合，培养于适宜的培养基中，通常为RPMI-1640，添加10%FBS和抗生素，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养48小时。
3.转导过程
3.1病毒准备：根据需要，制备或购买合适的慢病毒或腺病毒载体，确保其活性和纯度。
3.2转导细胞：将激活后的PBMC与病毒混合，使用聚乙烯亚胺（PEI）或其他转导试剂促进病毒进入细胞。
3.3培养：在转导后继续培养细胞，通常在37℃、5%CO2的条件下培养72小时，以确保转导效率。
4.细胞扩增
4.1细胞计数与活性检测：转导后，使用台盼蓝染色法或其他方法检测细胞的活性和存活率。
4.2扩增培养：将转导后的细胞接种于新的培养瓶中，添加IL-2等细胞因子，继续培养以促进细胞扩增。
4.3定期换液：每2-3天更换培养基，确保细胞获得充足的营养和生长因子。
5.细胞收集与质量控制
5.1细胞收集：当细胞达到预定的扩增倍数时，使用离心法收集细胞，去除培养基。
5.2细胞洗涤：用PBS或其他适宜的缓冲液洗涤细胞，去除残留的培养基和细胞因子。
5.3质量检测：对收集的Car-T细胞进行表型分析，使用流式细胞术检测CAR表达情况及细胞活性。
6.细胞冻存
6.1冻存液准备：使用含有10%DMSO和90%FBS的冻存液，确保细胞在冻存过程中的存活率。
6.2冻存过程：将细胞重悬于冻存液中，分装于冻存管中，逐管放入-80℃冰箱中预冷。
6.3**液
文档评论（0）