生技大三下学期课件-植物组织培养(3).ppt

1植物组织培养的基本原理1.1植物细胞的全能性植物细胞全能性（totipotency）：是指任何携带完整遗传信息的植物活细胞都具有表达其所有遗传信息的能力，能够发育成完整的植株。全能性是一种可能性，变为现实必须满足两个条件：解除抑制和给予刺激。细胞需经过脱分化和再分化过程才能表现其全能性。1.2植物细胞的分化与脱分化脱分化（dedifferentiation）：成熟细胞或分化细胞转变为分生状态（即形成愈伤组织）的过程。再分化（redifferentiation）：成熟细胞或分化细胞脱分化转变为愈伤组织后重新分化成异质细胞的过程。1.3植物的形态建成

1.3.1愈伤组织的诱导、生长和保持伤口可能导致愈伤组织的形成。愈伤组织形成可以在几乎所有的活的植物中发现。伤口愈伤组织的开始是植物的一种自我保护反应；内源植物激素水平的改变，结果使细胞分裂具有活性。机械损伤、微生物入侵以及昆虫的袭击也可以导致愈伤组织产生。1.3.1.1愈伤组织的诱导愈伤组织起源于母体组织增殖细胞。在培养时，通过把全植株的一小部分（外植体）在无菌条件下放到支持生长的培养基上来产生愈伤组织。激素改变了细胞的代谢使之从静止转变为具有活性。培养条件固体培养基暗培养液体培养基的缺点污染损失大不利于气体交换，影响愈伤组织形成。诱导期（启动期）细胞准备分裂。因植物种类和外植体状况而异。对大多数植物，愈伤组织建立相对比较容易；如双子叶植物、单子叶植物、裸子植物、蕨类植物以及苔藓等。来自多种器官的组织在适当的培养基上可能都有分裂和增生扩散的潜能，然而，某些组织似乎比另一些更倾向于使细胞快速分裂。一般需要1天到几天。1.3.1.2愈伤组织的生长诱导期后，外植体外层细胞开始分裂，在组织受伤表面形成一种创伤形成层，愈伤组织的细胞数目迅速增加。特点：细胞分裂速率大大超过细胞伸长速率，单个细胞的平均重量下降，体积变小。如菊芋外植体培养7d后，细胞数目增加10倍以上，鲜重仅增加1倍。愈伤组织类型质地：松脆、致密高生长素：致密变松脆。低或无生长素或高细胞分裂素：松脆变致密。颜色：白色、黄色、绿色、红色1.3.1.3愈伤组织的保持一段时间后，由于基本培养物的损耗、凝胶的干燥以及代谢物的积累，需要将愈伤组织转到新鲜的培养基上进行继代培养。愈伤组织继代培养时要有适当的大小，以保证在新鲜培养基上可以重建生长。通常每3～6周进行继代培养。大多数情况下，随继代培养代数的增加和培养时间的延长，愈伤组织出现生长势下降、褐变、分化和形态发生能力逐渐降低甚至死亡或发生能力完全丧失。遗传因素：染色体畸变、基因突变。生理因素：细胞内激素平衡或细胞对外源生长物质的敏感性发生改变。延长培养期可能使愈伤组织对生长素的需求发生变化，导致生长素的自给或自养，出现驯化现象。一般1年以上或10代以上出现。生理因素导致的形态发生能力下降可通过改变培养条件而恢复。1.3.2愈伤组织再分化愈伤组织生长过程中，开始细胞分裂局限在外层细胞，当表面细胞分裂逐渐减慢并停止时，内部较深处的细胞才开始分裂，且分裂的方向也发生改变，形成了维管化组织和瘤状结构，这是愈伤组织生长的一个共同特征。很多情况下，它们往往变成生长中心，但不进一步分化，并从它们的周围产生薄壁细胞，结果形成一种“泡沫球”增殖物，这仍然是生长活跃的愈伤组织的特点。随后这些小疣状物可以经历另一个发育过程，出现器官分化和体细胞胚状体的发生。在愈伤组织的培养过程中细胞分化的程度和类型有相当大的可变性。很难找到由完全一致的实质细胞组成的均一的愈伤组织。当形成导管元件、筛管元件、栓化细胞、分泌细胞等时就发生了细胞分化。一些分裂的细胞形成拟分生组织或维管节结，以后它们将变成芽顶点、根原基或初始胚形成的中心。再分化途径器官发生途径：愈伤组织先产生芽（或根），再在另一种培养基上产生根（或芽），然后形成完整植株。胚状体发生途径：愈伤组织形成胚状体，再在另一种培养基上同时发展成带有根的苗。也叫无性胚胎发生（无性系）。胚状体是指愈伤组织中形成的与种子中胚相似的具有苗端和根端的双极性结构。也叫体细胞胚。1.3.2.1器官发生先形成芽，后在芽基部长根。先形成根，后在根基部形成芽。在愈伤组织的不同部位分别形成芽和根，然后根、芽的维管束接通形成完整植株。仅形成芽或根。如茶树花粉愈伤组织往往只能形成根。1.3.2.2体细胞胚胎发生起源：合子胚是配子细胞融合的产物，即受精卵；对体细胞胚而言（合成的无性胚）融合是不需要的。形态：一个完全发育的胚是具有两极的轴，一端是芽分裂组织，另一端是根分裂组织；也可以根据一种特殊类型的叶片——子叶来辨别。进化：胚