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青蒿素对肾癌细胞株786—0细胞的增殖和Fascin表达的影响

目的：探讨青蒿素对肾癌细胞株786-0细胞的增殖和Fascin表达的影响。

方法：选用786-0肾癌细胞株，分别通过不同浓度的青蒿素作用细胞株，收集不

同时间点（0、24、48、72h）的细胞，运用细胞增殖CCK-8法测定青蒿素对肾

癌细胞株786-0细胞的增殖；通过WesternBlot检测青蒿素干预后肾癌细胞株

786-0细胞Fascin的表达。结果：随着药物浓度的增加，青蒿素可明显抑制肾癌

细胞株786-0细胞的增殖（P＜0.01），青蒿素可显著降低肾癌细胞株786-0Fascin

蛋白的表达（P＜0.05）。

结论：青蒿素通过抑制肾癌细胞增殖和Fascin蛋白的表达，从而抑制肿瘤

细胞的恶性增生。

腎癌又称肾细胞癌（renalcellcarcinoma，RCC）是指起源于肾皮质的具有异

质性的肿瘤[1]。肾癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，同时，肾癌起病

隐匿，多发现较晚。目前，膀胱癌各种预防和治疗的药物均不理想或毒副作用较

大。研究发现Fascin蛋白在多种恶性肿瘤组织中表达显著上调，其异常表达被

认为与肿瘤的发生、进展、侵袭及预后等生物学行为相关[2]。青蒿素是一类传

统的抗疟药，随着临床试验的深入研究，其抗肿瘤作用备受关注，而在肾癌方面

的研究国内外却报道甚少[3]。本实验以人肾癌细胞株786-0作为研究对象，应用

CCK-8法和WesternBlot等技术观察青蒿素对肾癌细胞株786-0的增殖和Fascin

蛋白的表达的影响。现报道如下。

1材料与方法

1.1材料、仪器与试剂材料：肾癌细胞株786-0（购买于上海中科院细胞库）。

仪器和试剂：多功能读板机（BeckmanPRADIGM）、蒸汽灭菌锅（上海申安医

疗器械厂）、电子天平（Satorius公司）、小型离心机（Eppendorf公司）、倒置相

差显微镜（日本索尼公司）、CellCountingKit-8（CCK-8试剂盒）（上海碧云天

生物技术有限公司）、FacsinMonocionalAntibody（美国Millipor公司）、羊抗鼠

二抗（SantaCruz公司）、RPMI1640培养基（Gibco公司）、胰蛋白酶（Hyclon

公司）、青蒿素、胎牛血清（Hyclon公司）、磷酸缓冲液（PBS）、96孔细胞培养

板、6孔细胞培养板、青霉素/链霉素双抗溶液、二甲亚砜（DMSO）[4]。

1.2细胞培养将肾癌细胞株786-0细胞于含10%胎牛血清RPMI1640培养

基，5%CO2和37℃培养箱中培养。当细胞培养至密度为60%～80%时传代，

收集细胞进行后续实验[5]。

1.3药物处理将青蒿素溶于DMSO，再用细胞完全工作液配制成200、100、

50、25mg/L四个不同浓度的工作液。

1.4CCK8法测定细胞增殖在96孔板中取24个孔（取板中间孔，周围一圈

弃置，加培养基防蒸发），做好相应标记，取4个孔加培养基作为空白组，其余

20孔中均加入100μL的细胞悬液（细胞计数2×103个/孔）。将培养板在37℃，

5%CO2培养箱培养24h，将孔中培养基吸出，向每孔加入100μL待测药物，

各浓度均设4个附孔。培养板继续置于培养箱孵育24h，向每孔加入10μLCCK-8

溶液。将培养板在培养箱内孵育1～4h，用酶标仪在450nm处测定其吸光度。

记录结果，以青蒿素浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。肾癌细

胞株786-0细胞抑制率（%）=（对照组吸光度-青蒿素药物组吸光度值）/对照组

吸光度×100%[6-8]。1.5WesternBlot检测Fascin的表达RIPA裂解液提取细胞总

蛋白，BCA法测定蛋白浓度，10%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后，半干转印到

PVDF膜，5%的脱脂奶粉中封闭90min，加一抗（Fascin1.25∶1000，β-actin1∶

1000）4℃过夜；洗膜后加入1∶1000的二抗稀释液室温下孵育1h。ECL显

色曝光，凝胶成像系统进行扫描分析