局部植入辛伐他汀诱导自体骨髓间充质干细胞归巢修复大鼠颅骨缺损.pdfVIP

局部植入辛伐他汀诱导自体骨髓间充质干细胞归巢修复大鼠颅

骨缺损

崔岳毅;宋纯理;谭杰;付鑫;陈仲强;刘忠军;党耕町

【摘要】目的探讨局部植入辛伐他汀修复大鼠颅骨极限骨缺损的机制,即诱导自体

骨髓间充质干细胞(BMSC)归巢.方法辛伐他汀5mg加聚乳酸20mg或单纯聚乳

酸20mg分别溶解于200μl丙酮,制备辛伐他汀聚乳酸复合材料或单纯聚乳酸材

料.16只SD大鼠尾静脉注射绿色荧光蛋白(GFP)标记的BMSC(GFP-BMSC)作为示

踪细胞,48h后制作大鼠颅骨极限缺损模型,并植入辛伐他汀-聚乳酸复合材料(n=8)

和单纯聚乳酸材料(n=8)进行修复.2周后经小动物活体荧光成像系统检测缺损处绿

色荧光信号,冰冻切片荧光显微镜下观察辛伐他汀组(n=4)和对照组(n=4)缺损处

GFPBMSC归巢.颅骨脱钙后经免疫组化染色检测辛伐他汀组(n=4)和对照组(n=4)

缺损处骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达.结果小动物活体荧光成像系统检测显示,辛

伐他汀组缺损处有较强的绿色荧光信号,对照组缺损处绿色荧光信号较弱;冰冻切片

荧光显微镜下观察发现,辛伐他汀组缺损处较对照组缺损处GFP阳性细胞数量明显

增加;免疫组化检测发现,辛伐他汀组BMP-2表达增加.结论局部植入辛伐他汀可诱

导自体BMSC归巢至缺损部位并参与修复,其诱导归巢过程可能与BMP-2表达上

调有关.

【期刊名称】《国际骨科学杂志》

【年(卷),期】2013(034)006

【总页数】4页(P431-434)

【关键词】辛伐他汀;绿色荧光蛋白;骨髓间充质干细胞;归巢;骨形态发生蛋白-2

【作者】崔岳毅;宋纯理;谭杰;付鑫;陈仲强;刘忠军;党耕町

【作者单位】100191,北京大学第三医院骨科;100191,北京大学第三医院骨

科;100191,北京大学第三医院骨科;100191,北京大学第三医院骨科;100191,北京

大学第三医院骨科;100191,北京大学第三医院骨科;100191,北京大学第三医院骨

科

【正文语种】中文

骨缺损一直是亟待解决的临床重要问题，目前修复骨缺损的金标准为自体骨移植。

自体骨移植成骨效果确切，但存在出血、感染、慢性痛等缺点［1］。近年来研究

［2，3］表明骨组织工程学方法在修复骨缺损方面具有很大的潜力和良好的应用

前景，但也存在干细胞来源少、价格昂贵等问题。有研究［4］发现，临床常用降

脂药他汀类药物具有良好的成骨效果，我们在既往实验中也发现局部植入辛伐他汀

可促进颅骨和桡骨极限骨缺损修复［5，6］，且可通过促进内皮祖细胞（EPC）

动员、归巢至缺损部位参与修复［7］，但骨髓间充质干细胞（BMSC）是否参与

骨缺损修复过程尚不清楚。本实验基于前期研究，通过小动物活体荧光成像系统及

冰冻切片荧光显微镜观察，检测绿色荧光蛋白（GFP）标记的BMSC在大鼠颅骨

极限缺损模型中的归巢情况及缺损处骨形态发生蛋白-2（BMP-2）表达，探索局

部植入他汀类药物修复骨缺损的作用机制。

1.1实验材料、试剂与设备

实验材料、试剂与设备包括辛伐他汀标准品（中国药品生物制品检定所）、聚乳酸

（相对分子质量20000，山东医疗器械研究所）、丙酮（北京鼎国生物技术有限

公司）、GFP-BMSC（广州赛业生物科技有限公司）、健康雌性3月龄SD大鼠

16只（体重250～300g，北京大学医学部实验动物科学部）、冰冻包埋剂OCT

（日本Sakura公司）、含4’，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI）荧光封片剂（美

国SouthernBiotech公司）、兔抗骨形态发生蛋白-2（Anti-BMP-2，美国

SantaCruz公司）、二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术

有限公司）、小动物活体荧光成像系统（美国CRi公司）、硬组织切片刀（德国

Leica公司）、荧光显微镜（德国Leica公司）和光学显微镜（德国Leica公司）。

1.2GFP-BMSC示踪

将第3代GFP-BMSC以1×1