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·５９４·中国药理学通报ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ２０２３Ｍａｒ；３９（３）：５９４～８
网络出版时间：２０２３－０３－１０１０：２２：５５网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１８１０．０５６．ｈｔｍｌ
实验方法学
基于ＣｒｅＬｏｘＰ系统构建一种新的时间特异性
突变ＮＬＲＰ３转基因小鼠模型
杨熙癑，周永婷，叶菜英，朱蕾
（中国医学科学院基础医学研究所，北京协和医学院基础学院药理系，北京１００００５）
ｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０７０２４ＮＬＲＰ３是核苷酸结合寡聚化结构域（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉｎｄｉｎｇ
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０３－０５９４－０５ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｄｏｍａｉｎ，ＮＯＤ）样受体家族的重要成员之一，可
中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ３６３３３２；Ｒ３６４５；Ｒ３９４２以识别病原相关分子模式或损伤相关分子模式（ｄａｎｇｅｒａｓｓｏ
摘要：目的应用ＣｒｅＬｏｘＰ系统构建一种新的时间特异性ｃｉａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｔｅｒｎｓ，ＤＡＭＰｓ），继而招募衔接蛋白凋亡相
ＮＬＲＰ３点突变转基因小鼠模型并对其进行鉴定。方法利关斑点样蛋白（ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｓｐｅｃｋｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔａｉ
用ＣｒｅＬｏｘＰ技术，构建ＮＬＲＰ３基因Ｔ３４６Ｍ点突变的ｆｌｏｘ杂ｎｉｎｇａＣＡＲＤ，ＡＳＣ）和半胱天冬蛋白酶Ｃａｓｐａｓｅ１前体（ｐｒｏ
Ｃａｓｐａｓｅ１）形成炎症小体复合物，介导ｐｒｏＩＬ１和ｐｒｏＩＬ１８
ｆｌｏｘ／＋β
合子（ＮＬＲＰ３）小鼠。将该小鼠与广谱表达Ｃｒｅ重组酶
工具鼠（ＣＡＧＣｒｅ／ＥＲＴ２，ＣｒｅＴ）杂交繁育，获得基因型ＮＬ的加工成熟以及引起细胞焦亡，参与固有免疫防御。然而，
ｆｌｏｘ／＋＋／－Ｔ３４６ＭＮＬＲＰ３炎症小体的过度激活会导致持续炎症反应和组织器
ＲＰ３ＣｒｅＴ小鼠，后者与ＮＬＲＰ３的ｆｌｏｘ纯合子（ＮＬ
ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ＋／－官损伤［１－２］。冷炎素相关周期热综合征（ｃｒｙｏｐｙｒｉｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ＲＰ３）小鼠进一步交配获得ＮＬＲＰ３ＣｒｅＴ（ＫＩ／
ｆｌｏｘ／＋＋／－ｐｅｒｉｏｄｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＣＡＰＳ）即是ＮＬＲＰ３基因突变导致ＮＬＲＰ３
ＫＩ）和ＮＬＲＰ３ＣｒｅＴ（ＫＩ／ＷＴ）小鼠，于６～８周时经他
炎症小体持续活化所引起的自身炎症性疾病［３］。此外，ＮＬ
Ｔ３４６Ｍ
莫昔芬的诱导实现ＮＬＲＰ３突变基因的时间特异性敲入。
ＲＰ３炎性小体的异常活化还与心血管疾病、败血症、痛风、２
小鼠繁育和鉴定过程中，用ＰＣＲ方法检测鼠尾基因组ＤＮＡ。
型糖尿病、神经退行性疾病和肿瘤等多种疾病密切相关，使
采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测小鼠肝脏和心脏中ＮＬＲＰ３、ｐｒｏ
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