原创力文档- 1、本文档共2页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
维普资讯
ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＡＴ０ＭＹＶｏ１．３１Ｎｏ．１２００８解剖学杂志２００８年第３１卷第１期
体外阻断卵巢颗粒细胞转化生长因子信号转导通路模型的建立
董静霞卫晓红徐健△祁丽花迟晓春
（ＪＬ京大学医学部人体解剖学与组织胚胎学系，北京１０００８３）
本实验以选取转化生长因子ＢＩＩ型受体（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＰＢＳ换洗３次；４多聚甲醛固定细胞，室温１５ｍｉｎ；经ＰＢＳ
ｇｒｏｗｔｈ／ａｃｔｏｒ一口ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｐｅＩＩ，ＴＧＦ－？／ＲＩＩ）抗体的不同剂量洗后。滴加浓度为１：１Ｏ０的ＴＧＦ－？／ＲＩＩ抗体，阴性对照组以
和不同孵育时间，对原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞表面ＴＧＦ－１３ＲＰＢＳ代替，４℃条件下湿盒孵育过夜；用ＳＰ－９００１试剂盒，按
Ⅱ进行中和，从而达到建立体外阻断ＴＧＦ－３信号转导通路模型［说明书方法操作，ＤＡＢ显色，Ｍａｙｅｒ苏木精复染，经脱水、透
的目的。为研究与ＴＧＦ－？信号转导通路／相关的各种调节因素明后，树胶封固于载玻片上。显微镜下观察、照相。
提供了体外研究的新模型。１．５免疫印迹法
从培养箱中取出培养皿，用细胞刮轻轻刮取收集颗粒细
１材料和方法
胞，加入ＲＩＰＡ蛋白提取液，提取颗粒细胞总蛋白，并测定蛋白
１．１动物浓度，沸水３～５ｍｉｎ使蛋白变性。聚丙烯酰胺凝胶电泳，浓缩
２１ｄＳＤ大鼠（雌性），体质量约５Ｏｇ（北京大学医学部实验胶５，分离胶１Ｏ，蛋白上样量为每个泳道５Ｏｇ，设定电压
动物部提供）；ＴＧＦ－￣ＲＩＩ抗体（兔抗鼠，ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品）；８ＯＶ，４０ｍｉｎ待样品进入分离胶后电压转为１２０Ｖ，电泳约
ＳＰ－９００１试剂盒（ＪＬ京中杉金桥生物有限公司产品）；Ａｃｔｉｎ（羊抗２ｈ，直至指示剂达到分离胶底部。然后转膜、脱脂奶粉封闭，
鼠，ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品）。２ｎｇ／ｍＴＧＦ－ｌ￣ＲＩＩ抗体孵育过夜，Ⅱ抗孵育，洗膜，在暗盒内经
超敏发光液用Ｘ＿光片曝光、显影，自来水洗、定影。Ａｃｔｉｎ为内
１．２细胞培养
每只大鼠腹腔注射孕马血清ＰＭＳＧ２０ＩＵ，４８ｈ后，在无菌对照。
条件下迅速断颈，打开腹腔，取出双侧卵巢，置于无血清的２结果
ＤＭＥＭ培养液中。在解剖镜下去除周围多余组织及包膜，用
１ｍｌ注射器针头戳破卵泡，使颗粒细胞充分释放于培养液后，将２．１免疫细胞化学
卵巢弃之。收集颗粒细胞至离心管离心（１０００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ）棕色反应产物即为ＴＧＦ－￣ＲＩＩ阳性表达，蓝色为细胞核。其
后，去上清，加入含１５胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液，反复吹打中对照组ＴＧＦ—ＢＲＩＩ阳性表达明显，主要定位于细胞膜（图１）；
使细胞悬浮；按２×１０／
文档评论（0）