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盐碱胁迫下紫花苜蓿叶片蛋白组的初步分析

李波;方志坚;邬婷婷;李红;杨曌;赵宇佳

【摘要】以紫花苜蓿(Medicagosativa)品种\WL343HQ\为材料,对其幼苗进行

150mmol·L-1的Na2CO3和NaH-CO3混合盐碱胁迫,采用iTRAQ技术结合反

相液相色谱与液相串联色谱,分析盐碱胁迫叶片中蛋白表达的变化,并对获得的差异

蛋白进行生物信息学分析.结果表明,在盐碱胁迫处理下共鉴定到318个显著差异蛋

白,包括172个上调蛋白和146个下调蛋白,这些差异蛋白的功能涉及多种代谢途径,

其中与光合作用相关的蛋白质表达量总体下调,与苯丙素生物合成、苯丙氨酸代谢

和类黄酮生物合成相关的蛋白质表达量总体上调.通过蛋白组学分析技术可有效筛

选紫花苜蓿叶片中差异表达蛋白,可为深入研究紫花苜蓿应对盐碱胁迫的分子机制

提供一定的理论基础.

【期刊名称】《草地学报》

【年(卷),期】2019(027)003

【总页数】7页(P574-580)

【关键词】紫花苜蓿;苏打盐碱胁迫;蛋白质组;差异蛋白;代谢途径

【作者】李波;方志坚;邬婷婷;李红;杨曌;赵宇佳

【作者单位】齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,抗性基因工程与寒地生物多样性

保护黑龙江省重点实验室,黑龙江齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林

学院,抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江省重点实验室,黑龙江齐齐哈尔

161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑

龙江省重点实验室,黑龙江齐齐哈尔161006;黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院,黑

龙江齐齐哈尔161005;黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院,黑龙江齐齐哈尔

161005;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑

龙江省重点实验室,黑龙江齐齐哈尔161006

【正文语种】中文

【中图分类】S963.22+3.3

土地盐碱化是非常重要的非生物胁迫，严重影响作物的生产和农业生产力[1]。土

壤盐渍化问题在世界范围内广泛存在，已成为制约农业发展的主要因素之一[2]。

高浓度盐碱会导致植物体缺水，对植株有一定的离子毒害作用，严重的会导致植株

的死亡。在当今日益稀缺的土地资源中，盐碱地的改良利用已成为全球科研界研究

的热点和难点之一[3]。近年来，以耐盐植物改善盐碱土壤的技术逐渐受到关注。

紫花苜蓿(Medicagosativa)是一种重要的多年生豆科牧草[4]，除作为饲料牧草外，

还可以用作绿肥使用[5]。因其叶片具有排盐机制，是一种耐盐性较强的牧草[6]。

蛋白质是生命活动的物质基础，是细胞生理功能的执行者，多个蛋白质通过协同作

用来应对细胞的一系列生理生化的变化[7]。而植物的耐盐机理与多种大分子密切

相关，是一个复杂的反应过程[8]。同位素相对标记与绝对定量(IsobaricTagsfor

RelativeandAbsoluteQuantization，iTRAQ)技术是在2004年推出的一种通

过对氨基酸N端及赖氨酸残基酶解并用同位素标记的技术。该技术的原理是采用

同重同位素标签进行肽段标记，可同时对多达4(或8)种蛋白样品进行相对或绝对

定量及差异蛋白功能的生物信息学分析的蛋白质测定技术[9]。随着现代分子生物

学的不断发展，iTRAQ技术因其具有高定量精度的特点而在蛋白组学中应用广泛

[10]。近年来，不断完善的蛋白组学技术在紫花苜蓿的耐盐分子机制研究也受到重

视，裴翠明[11]等发现了417个差异蛋白参与苜蓿幼苗叶片耐NaCl胁迫；马进

[12]等人发现有534个差异蛋白响应盐胁迫。本研究利用iTRAQ技术从分子水平

上研究紫花苜蓿叶片抗盐碱机理，筛选响应盐碱胁迫的差异表达蛋白，对差异表达

蛋白进行GO注释和KEGG注释，分析在盐碱胁迫下紫花苜蓿叶片差异表达蛋白

具体的代谢途径，发掘抗盐碱的应答机制，对盐碱地的改良、苜蓿耐盐植株的筛选

和植物抗盐碱功能蛋白的发掘具有重要的意义。

1材料与方法

1.1材料

本研究采用由黑龙江省畜牧研究所提供的紫花苜蓿WL343HQ种子为试验材料。

本实验Hoagland培养液所用的无机盐均购自天津市凯通化学试剂有限公司，

RNA采用TRIZOL方法进行提取(ChengD)，RNA反转录试剂盒和荧光定量PCR

试剂盒均购自宝日医生