生物制药综合性实验实验报告 .pdfVIP

广东药学院

基因工程（跨课程）综合性实验论文

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指导教师

广东药学院

生命科学与生物制药学院生物制药研究所

目录

摘要2

前言3

一、材料与方法3

1.1材料3

1.1.1重组蛋白质药物单元的实验材料3

1.1.2重组DNA药物单元的实验材料3

1.2方法4

1.2.1重组蛋白质药物单元4

1.2.1.1工程菌构建（已由老师完成）4

1.2.1.2工程菌表达筛选6

1.2.1.3制备IL-18工程菌甘油种8

1.2.1.4GST工程菌生长曲线分析8

1.2.1.5GST工程菌表达影响因素试验8

1.2.1.6表达进程分析9

1.2.1.7凝胶扫描分析9

1.2.1.8发酵工艺（观摩）9

1.2.2重组DNA药物单元9

1.2.2.1质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备9

1.2.2.2TCR质粒-脂质体复合物制备与分析10

1.2.2.3TCR体外转染活性检测11

1.2.2.4TCR转染体内试验12

二、结果与讨论12

2.1重组蛋白质单元结果与讨论12

2.1.1IL-18工程菌表达筛选SDS12

2.1.2GST工程菌生长曲线分析14

2.1.3表达影响因素试验15

2.1.4表达进程试验16

2.2重组DNA药物单元结果与讨论18

2.2.1质粒阴离子交换层析纯化18

2.2.2质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析19

2.2.3质粒-脂质体复合物制备20

2.2.4TCR转染基因表达荧光检测20

2.2.5TCR体外转染活性检测21

2.2.6TCR转染体内试验23

三、小结25

致谢25

1

摘要：本综合性实验分为“重组蛋白质类药物”和“重组DNA类药物”二个单元。

重组蛋白质药物以hIL-18的大肠杆菌表达系统为例，全面介绍工程菌构建、表达

筛选、甘油种制备、生长与表达分析、发酵工艺单元操作和表达产物分离纯化等

基因工程药物研发与生产实践中最常用的技术与工艺过程。“重组DNA药物”单元

以质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP为例，介绍质粒DNA大规模制备、阳离子脂质体

与质粒DNA复合物制备、T细胞体外转染、转染T细胞目的基因表达和体外活性检

测、体内给药试验等。

关键词重组蛋白药物;hIL-18;重组DNA药物;阳离子脂质体与质粒DNA复

合物

Abtract：Thecomprehensiveexperimentsaredividedintotwounits,whichis

RecombinantProteinDrugsandRecombinantDNADrugs.Theunit,Recombinant

thegeneticengineeringdrugs,suchastheconstructionofengineeringbacteria,

expressionscreening,glycerolkindofpreparatio