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畜牧与兽医２０２４年第５６卷第５期·１０７·
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于雯，孙慧敏，方晨捷，等．猫杯状病毒反向遗传系统的建立及弱毒株的构建［Ｊ］．畜牧与兽医，２０２４，５６（５）：１０７１１２．
ＹＵＷ，ＳＵＮＨＭ，ＦＡＮＧＣＪ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｖｅｒｓｅｇｅｎｅｔｉｃｓｙｓｔｅｍｆｏｒｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉ⁃
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ｃｉｎｅ，２０２４，５６（５）：１０７１１２．
猫杯状病毒反向遗传系统的建立及弱毒株的构建
１２２２∗１∗
于雯，孙慧敏，方晨捷，宋家升，鲍恩东
（１．南京农业大学动物医学院，江苏南京２１００９５；
２．浙江迪福润丝生物科技有限公司，浙江杭州３１００００）
摘要：－－－－
为了构建猫杯状病毒（ＦＣＶ）弱毒疫苗候选株，从杭州流行的ＦＣＶ毒株ＦＣＶＨＺＤＦ１９中提取基因组ＲＮＡ，利用ＲＴＰＣ技Ｒ术分３段
扩增获得ＦＣＶ全基因组，通过同源重组的方法将全长基因组克隆至已插入榔头状核酶（ＨａｍＲｚ和丁型肝炎核酶）（ＨｄｖＲｚ的Ｐ）Ｃ载体Ｉ，获得中
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间质粒ｐＰＣＦＣＶ；Ｉ以ｐＰＣＦＣＶＩ为模板扩增获得含ＨａｍＲｚ、Ｈｄｖ和ＲｚＦＣＶ全基因组的产物ＦＣＶＨ，并将其连接到ＢＡＣ载体中获得含有ＦＣＶ全
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基因组的克隆ｐＢＡＣＦＣＶ将。ｐＢＡＣＦＣＶ转染猫肾细胞Ｆ８连续１传代后收获病毒。针对ＦＣＶ毒力相关的ＬＣ基因进行缺失，获得感染性克隆
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ｐＢＡＣＦＣＶΔＬＣ，通过转染表达ＦＣＶＶＰ蛋白１的猫肾细胞系进行病毒拯救。结果显示，拯救毒株ｒＢＡＣＦＣＶ和ＬＣ基因缺失毒株ｒＢＡＣＦＣＶ
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ΔＬ均可产Ｃ生细胞病变；测序结果表明，拯救毒株的基因序列与亲本毒株ＦＣＶＨＺＤＦ１９一致，且生长曲线与亲本毒相似，而基因缺失毒株的
生长则慢于亲本毒株，产生的噬斑大小也明显小于亲本毒株，表明缺失ＬＣ基因后病毒毒力下降。结论：本研究成功构建了ＦＣＶ的反向遗传系统
及基因缺失弱毒株，为后续弱毒疫苗研发和ＦＣＶ生物学特性研究奠定了基础。
关键词：猫杯状病毒；反向遗传学技术；同源重组；基因缺失
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中图分类号：Ｓ８５２６５ခ文献标志码：Ａ文章编号：２０２４
Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｖｅｒｓｅｇｅｎｅｔｉｃｓｙｓｔｅｍｆｏｒｆｅｌｉｎｅ
ＹＵＷｅｎ，ＳＵＮＨｕｉｍｉｎ，ＦＡＮＧＣｈｅｎ，ｊＳｉｅＯＮＧＪｉａｓｈ，ｅｎｇＢＡＯＥｎｄｏｎｇ
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