HE染色原理与试剂配制-梁英杰(1).pptVIP

曙红的性质*曙红（eosin）：又称伊红，为桃红色或粉红色的粉末。*曙红属于---人工合成染料（根据染料的来源）---酸性染料（根据染料中所含助色团的性质）*曙红分为：曙红Y，Y是带黄色之意，与蓝色的苏木精对比染色好。曙红B，略带蓝色，与蓝色的苏木精对比染色不理想。*HE染色选用曙红Y而不用曙红B。*曙红的种类*曙红是由荧光素衍生而来，主要有2种：1.水溶性曙红Y（eosinY，watersoluble）,也称曙红钠盐、黄光曙红或四溴荧光素钠，易溶于水，微溶于乙醇2.醇溶性曙红Y（eosinY，alcoholsoluble）,称四溴荧光素，易溶于乙醇，不溶于水。*曙红染色液的配制*配制曙红染色液所用的试剂：曙红Y（水溶性），曙红Y（醇溶性）80%无水乙醇 冰醋酸无水氯化钙蒸镏水*不同的试剂所起的作用不同*曙红染色液的配制*曙红染液的种类：(1)0.5％曙红水溶液：曙红Y，水溶性（eosinY，watersoluble）1g蒸馏水200ml冰醋酸（glacialaceticacid）1滴*曙红染色液的配制*曙红染液的种类：(2)0.5％醇溶曙红染液：曙红Y，醇溶性（eosinY，alcoholsoluble）1g80％乙醇200ml冰醋酸（glacialaceticacid）1滴*曙红染色液的配制*曙红染液的种类：（3）氯化钙-曙红染液曙红Y，水溶性（eosinY，watersoluble）1g蒸馏水200ml无水氯化钙（calciumchlorate，anhydrous）1g*曙红染色液染色机制*曙红染色机制还不完全明确。*水溶性曙红Y含有一个醌型苯环的发色团和两个形成钠盐的酸性助色团（R-COONa、R-ONa）。在水中溶解时，就离解为带负电荷的基团（R-COOˉ、R-Oˉ）*曙红Y（带负电荷）以离子键的形式结合组织着色组织内的物质（带正电荷）不同曙红染液的特点*水溶曙红染液配制简单，最为常用，但染液容易长霉和出现沉淀，需经常过滤，加冰醋酸的量要恰当。*醇溶曙红染液染色后不用水洗，可直接经乙醇脱水、二甲苯透明和封片。*氯化钙－曙红Y染液因氯化钙水溶液呈弱酸性（pH5～6）,因此不需要添加冰醋酸，染色鲜艳，但要注意避免产生沉淀。*可根据需要选用不同的曙红液，较常用的是0.5％曙红水溶液。*HE染色1．石蜡切片常规脱蜡至水，蒸馏水稍洗。2.改良Lillie-Mayer苏木精染液染色5min～8min3．流水冲洗2s～3s4．1％盐酸乙醇2s～5s5．流水冲洗15min～20min6.0.5％曙红水溶液染色2min～5min7.流水冲洗3s～5