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共聚焦显微镜

从一个点光源发射得探测光通过透镜聚焦到被观测物体上,如果物体恰在焦点上,那么反射光通过原透镜应当汇聚回到光源，这就就就是所谓得共聚焦,简称共焦。共焦显微镜［confocallaseｒscａnniｎｇmiｃroscope(ｃlsm或lｓcｍ)]在反射光得光路上加上了一块半反半透镜(dｉcｈｒoicｍirroｒ),将已经通过透镜得反射光折向其它方向，在其焦点上有一个带有针孔(pinhoｌe)得挡板,小孔就位于焦点处,挡板后面就就是一个光电倍增管?（phｏtｏmultｉｐlierｔｕbｅ,pｍｔ）。可以想像,探测光焦点前后得反射光通过这一套共焦系统,必不能聚焦到小孔上，会被挡板挡住。于就就是光度计测量得就就就是焦点处得反射光强度。其意义就就是:通过移动透镜系统可以对一个半透明得物体进行三维扫描。?激光扫描共聚焦显微镜就就是二十世纪８0年代发展起来得一项具有划时代得高科技产品，它就就是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置,利用计算机进行图像处理，把光学成像得分辨率提高了30%－-40%，使用紫外或可见光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构得荧光图像,在亚细胞水平上观察诸如ｃa2+、ｐh值，膜电位等生理信号及细胞形态得变化,成为形态学,分子生物学，神经科学,药理学,遗传学等领域中新一代强有力得研究工具。激光共聚焦成像系统能够用于观察各种染色、非染色与荧光标记得组织与细胞等,观察研究组织切片,细胞活体得生长发育特征，研究测定细胞内物质运输与能量转换。能够进行活体细胞中离子与ph值变化研究（ratio),神经递质研究,微分干涉及荧光得断层扫描,多重荧光得断层扫描及重叠,荧光光谱分析荧光各项指标定量分析荧光样品得时间延迟扫描及动态构件组织与细胞得三维动态结构构件,荧光共振能量得转移得分析,荧光原位杂交研究(fish）,细胞骨架研究，基因定位研究,原位实时pcr产物分析,荧光漂白恢复研究(fｒaｐ）,胞间通讯研究，蛋白质间研究,膜电位与膜流动性等研究,完成图像分析与三维重建等分析。?一、激光共聚焦显微镜系统应用领域:

涉及医学、动植物科研、生物化学、细菌学、细胞生物学、组织胚胎、食品科学、遗传、药理、生理、光学、病理、植物学、神经科学、海洋生物学、材料学、电子科学、力学、石油地质学、矿产学。?二、基本原理

传统得光学显微镜使用得就就是场光源,标本上每一点得图像都会受到邻近点得衍射或散射光得干扰;激光扫描共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面得每一点扫描,标本上得被照射点,在探测针孔处成像,由探测针孔后得光电倍增管(ｐmt)或冷电耦器件(ｃd)逐点或逐线接收,迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面就就是共轭得,焦平面上得点同时聚焦于照明针孔与发射针孔,焦平面以外得点不会在探测针孔处成像,这样得到得共聚焦图像就就是标本得光学横断面,克服了普通显微镜图像模糊得缺点。?三、应用范围:?细胞形态学分析(观察细胞或组织内部微细结构,如:细胞内线粒体、内质网、高尔基体、微管、微丝、细胞桥、染色体等亚细胞结构得形态特征;半定量免疫荧光分析);荧光原位杂交研究；基因定位研究及三维重建分析。

1、细胞生物学:细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构与分布变化?2、生物化学：酶、核酸、fisｈ(荧光原位杂交)、受体分析

3、药理学:药物对细胞得作用及其动力学?4、生理学：膜受体、离子通道、细胞内离子含量、分布、动态?５、神经生物学:神经细胞结构、神经递质得成分、运输与传递、递质受体、离子内外流、神经组织结构、细胞分布

６、微生物学与寄生虫学:细菌、寄生虫形态结构

7、病理学及临床应用:活检标本诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病诊断、hiｖ等

8、遗传学与组胚学:细胞生长、分化、成熟变化、细胞得三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断

四、激光共聚焦显微镜在医学领域中得应用a、在细胞及分子生物学中得应用1、细胞、组织得三维观察与定量测量2、活细胞生理信号得动态监测3、粘附细胞得分选４、细胞激光显微外科与光陷阱功能5、光漂白后得荧光恢复6、在细胞凋亡研究中得应用b、在神经科学中得应用?1、定量荧光测定?2、细胞内离子得测定

3、神经细胞得形态观察?ｃ、在耳鼻喉科学中得应用

1、在内耳毛细胞亚细胞结构研究上得应用

2、激光扫描共聚焦显微镜得荧光测钙技术在内耳毛细胞研究中得应用

3、激光扫描共聚焦显微镜在内耳毛细胞离子通道研究上得