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黄芪总提取物促进PBMC对肝癌细胞的体外杀伤作用

王金全;陈启助;黄树林;薄华本

【摘要】目的观察黄芪总提取物(TAE)与人外周血单个核细胞(PBMC)联用对肝癌

细胞株BEl-7402的体外杀伤作用.方法MTT法及流式细胞术分别检测TAE与

PBMC在单独、联合应用情况下对BEL-7402细胞的杀伤活性,Burgi修正公式评

价药物联合应用对细胞杀伤效果是否具有协同作用,ELISA法检测TAE对PBMC分

泌IFN-γ、TNF-α细胞因子的影响.结果TAE与PBMC联用对肝癌细胞BEl-7402

具有协同杀伤作用.TAE预先与PBMC孵育后两者协同杀伤作用明显增强.TAE可

以刺激PBMC分泌IFN-γ、TNF-α细胞因子.结论TAE可以促进PBMC对肝癌细

胞的体外杀伤能力,二者联用具有协同杀伤作用,其作用机制可能是TAE刺激PBMC

分泌IFN-γ和TNF-α以增强免疫杀伤能力.

【期刊名称】《广东药学院学报》

【年(卷),期】2016(032)001

【总页数】5页(P66-70)

【关键词】黄芪;PBMC;协同作用;抗肿瘤活性;免疫细胞治疗

【作者】王金全;陈启助;黄树林;薄华本

【作者单位】广东药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室,广东广州

510006;广东药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室,广东广州510006;

广东药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室,广东广州510006;广东药学

院广东省生物技术候选药物研究重点实验室,广东广州510006

【正文语种】中文

【中图分类】R285.5

原发性肝癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一，其起病隐匿且发展迅猛，大多数患者

在临床确诊时已到晚期失去手术机会[1]。故药物治疗是其重要的治疗手段之一，

然而目前临床应用的化疗手段毒副作用大，疗效不甚理想，所以寻找新的药物及治

疗方法成为当务之急。黄芪(astragalus)是豆科多年生草本植物荚膜黄芪和内蒙黄

芪的干燥根，黄芪总提物(totalastragalusextract,TAE)是从黄芪中提取的有效部

位群。黄芪入药始载于《神农本草经》，其性温、味甘，具有补气升阳、益气固表、

利尿托毒敛疮生肌等功效[2]。现代科学研究发现，黄芪除具有传统药效之外，还

具有抗炎、抗氧化、免疫调节以及抑制肿瘤细胞生长等作用[3]。有研究报道黄芪

可以直接杀伤肿瘤细胞，但另有研究显示黄芪是通过调节机体功能来抑制肿瘤细胞

[4]。为明确黄芪抗肿瘤作用及相关机制，本文采用TAE与人外周血单个核细胞

(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)单独或者联合应用，考察二者对肝

癌细胞BEL-7402的杀伤活性及影响因素，以期为临床肝脏恶性肿瘤的治疗提供一

定的治疗思路及方法。

1.1主要材料、试剂及仪器

黄芪总提取物为本室制备，黄芪水煮沸提取2h，提取液趁热过滤，残余药渣用相

同的方法重新提取1次，合并2次提取液，用旋转蒸发仪浓缩药液成含生药质量

浓度1g/mL的水煎液，4℃储存备用。淋巴细胞分离液(天津市灏洋生物制剂技

术公司)；1640和DMEM培养基(Gibco公司)；胰蛋白酶(Amresco)；胎牛血清

(Gibco公司)；MTT(Sigma)；人肿瘤坏死因子α(TNF-α)、人干扰素-γ(IFN-γ)检

测试剂盒(ELISA法，上海江莱生物科技有限公司)；CO2孵箱(NAPCO)；iMark

酶标仪(Biorad)；流式细胞仪(CoulterElite)。

1.2肿瘤细胞培养

人肝癌细胞株BEL-7402为本室保存。细胞置于37℃，5%(φ)CO2饱和湿度的培

养箱中，在含有10%(φ)新生胎牛血清、100U/mL青霉素和100U/mL链霉素的

DMEM培养基中培养和传代。如无特殊说明，实验所用细胞均处于对数生长期。

1.3淋巴细胞的分离和培养

取健康人外周血，Ficoll-Hapaque密度梯度离心法分离健康供血者外周血PBMC,

用1640将细胞调至2×106/mL。移至培养瓶中竖立培养