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不同消化时间下胶原酶对人脐带间充质干细胞分离的影响

目的：比较胶原酶的不同消化时间，观察所获得的间充质干细胞的数量，

确定最为理想的消化时间。方法：分别采用3h、5h、7h的消化时间分离脐带间

充质干细胞；通过传代进行纯化和扩增培养，绘制生长曲线；用流式细胞仪检测

其表面标志。结果：分离出的间充质干细胞贴壁后为梭形，呈平行排列生长或漩

涡状生长，并且消化时间为5h时收获到的细胞数量最多；流式细胞仪检测结果

显示，获得的间充质干细胞均表达CD73、CD105、HLA-ABC，不表达CD34、

CD45、HLA-DR。结论：胶原酶消化法从人脐带中分离培养的细胞具有间充质

干细胞的生物学特性，并且消化5h收获得的间充质干细胞数量最多，生长状况

最好。

标签：胶原酶；脐带；间充质干细胞；分离；消化时间

TheimpactofdifferentcollagenasedigestiontimeonUCMSCsseparation

HAOShi-kai，SUXiang-xiang，HONGJing-xin

UNIONSTEMCELLGENEENGINEERINGCO.LTD，Tianjin300384，China

Abstract：ObjectiveComparingthequantityofMSCsacquiredfromumbilical

cordthatdigestedbycollagenaseIIindifferenthours，ascertainanidealdigesting

timeandcultureandappraisethecellsacquired.MethodsMSCswereisolatedfrom

humanumbilicalcordthroughcollagenasedigestionrespectivelyin3h，5h，7h，

thenpassagedtopurifyandculture，drewthegrowthcurve.Theirsurfacemarkers

andcellscycleweredetectedbyflowcytometry.ResultsMSCsisolatedfrom

umbilicalcordadheredwithaspindle-shape，theyparallelalongtheirlongitudinal

axisorgrewinwhirlmanner.After5hoursdigestion，wegotthebiggestquantity

withbestgrowthstatus，andsuccessfullybuiltthemethodforMSCscultureand

increasing.Detectedbyflowcytometry，allofadherentcellsexpressCD73、CD105、

HLA-ABC，noneofthemexpressCD34、CD45、HLA-DR.ConclusionCellsisolated

hoursisthebesttimefordigestiontoacquirethemostandbestMSCs.

Keywords：Collagenase；Umbilicalcord；MesenchymalStemCells；Isolate；

Digestiontime

间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是一种多潜能干细胞，具

有自我更新、高度增殖和多向分化的潜能，在人体生长、发育过程中存在于多种

组织中。目前，MSCs主要来源于人骨髓，但成人骨髓中MSCs容易被病毒感染，

且强的免疫原性等因素限制了其临床应用[1]。此外骨髓来源的间充质干细胞还

存在以下问题：随着年龄的老化，干细胞数目显著降低，增殖分化能力大幅度衰

退；制备过程不容易质控；移植给异体可能引起免疫反应；取材时对患者有损伤，

患者有骨髓疾病时不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。这都限

制了骨髓间充质干细胞临床应用，使得寻找骨髓以外其他可替代的间充质干细胞

来源成为一个重要的问题[2]。

最近，在人的脐