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Caveolin-1蛋⽩的表达纯化及其与肿瘤的关系研究

细胞窖存在于成纤维细胞、内⽪细胞、I型肺泡上⽪等多种终末分化细胞中，是细胞质膜上直径为50~100nm的烧瓶状微内

陷结构，其中Caveolin-1蛋⽩是细胞窖的重要的结构蛋⽩。有研究认为Caveolin-1参与调控了与肿瘤发⽣、发展、侵袭和转移

以及⾎管形成相关因⼦的活性。进⾏Caveolin-1蛋⽩表达纯化，有利于获得较⾼纯度的蛋⽩，为进⼀步研究其⽣物学活性奠定

了基础。

1、Caveolin-1蛋⽩表达纯化研究

作为⾃然界⽣命活动的重要参与部分的蛋⽩质，⼏乎都是以复杂的混合形式存在于细胞的各个结构中的。在不破坏蛋⽩质

的空间结构及⼀级结构⽽不影响其⽣理功能的情况下，完全把蛋⽩质分离、纯化出来，均有很⼤的难度。为了增加蛋⽩样品的

纯度和保持样品的活性，需要进⾏蛋⽩分离和蛋⽩纯化，采⽤基因⼯程技术可以进⾏蛋⽩表达纯化研究。美迪西提供蛋⽩纯化

服务，其拥有多种蛋⽩表达协同，包括原核蛋⽩表达系统、酵母蛋⽩表达系统、昆⾍细胞蛋⽩表达系统（杆状病毒）哺乳动物

细胞蛋⽩表达系统，具备多种融合技术，可以为客户在蛋⽩表达与纯化⽅⾯提供多种选择。从⽅案设计、基因优化、表达条件

优化到纯化的技术体系，以提⾼⽬的蛋⽩表达⽔平。

[1]

有研究者运⽤基因⼯程⽅法制备Caveolin-1重组蛋⽩及其抗体，为研究Caveolin-1的功能奠定基础。⽅法构建原核表达

载体pGEX-5X-1-Caveolin-1，酶切鉴定后，转化⼤肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达。表达产物经SDS及Western

blot⽅法鉴定基因⽚段的正确性及表达蛋⽩的特异性后，进⾏纯化。纯化的重组蛋⽩免疫Balb/c⼩⿏3次后，ELISA法测定兔多

克隆抗体滴度。

结果克隆得到的⽬的基因⽚段⼤⼩与预期相符。重组Caveolin-1蛋⽩相对分⼦质量约为48000，以包涵体形式存

在Caveolin-1蛋⽩N端融合GST标签便于纯化及鉴定。获得的⾼纯度Caveolin-1融合蛋⽩，免疫动物后，可产⽣特异的⾼滴度

抗体(ELISA滴度达1:10000)。该研究构建了⾼表达Caveolin-1蛋⽩的原核表达系统，制备的Caveolin-1重组蛋⽩免疫动物，获

得了特异、⾼效价的抗体，为研究Caveolin-1基因的⽣物学活性提供了实验材料和依据。

2、Caveolin-1与肿瘤的关系

Caveolin-1最初被认为是⼀种肿瘤抑制基因，Caveolin-1的mRNA和蛋⽩在正常组织中⾼表达，⽽在神经原细胞、卵巢

癌、结肠癌、⾁瘤、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞系中表达下降。Caveolin-1对肿瘤细胞的侵袭和转移都能起到抑制作⽤。在

癌基因转化的细胞系中Caveolin-1重新表达则可以抑制细胞的⽣长并降低其致瘤性。

[2]

有研究者研究了宫颈癌组织Caveolin-1免疫组化检测及其在宫颈癌发⽣、发展中的作⽤机制。⽅法是采⽤免疫组化法检

测Caveolin-1的表达情况。结果发现Caveolin-1于细胞膜及胞浆内呈现出棕黄⾊或棕褐⾊反应物颗粒，不同宫颈组织中

的Caveolin-1表达存在⼀定的差异性，癌旁边组织的表达率最⾼，宫颈浸润癌中的表达率最低，在宫颈浸润癌、期患者

中Caveolin-1的表达率分别是88.52%、57.50%(P0.05)，在⾼、中、低分化癌中的表达率分别为94.59%、70.00%、50.00%

(P0.05)。Caveolin-1在宫颈癌中的表达降低，提⽰其表达的降低可能参与了宫颈癌的发⽣、发展过程。

肿瘤发⽣的主要原因是原癌基因的激活和抑癌基因的失活，从⽽引起细胞增殖分化失去控制。Caveolin-1有时被描述为肿

瘤抑制因⼦，有时也被认为促进了肿瘤的发展。研究发现Caveolin-1根据肿瘤类型及分期可以起到促癌或者抑制癌症发⽣的作

⽤。通过基因⼯程技术进⾏Caveolin-1蛋⽩表达纯化，来获得⾜够多的Caveolin-1蛋⽩并进⾏后续的其对于肿瘤的调节机制的

研究，为今后以Caveolin-1为靶点的抗肿瘤药物的开发⾄关重要。

[1]Caveolin-1克隆、表达及其抗体的制备[J].

[2]宫颈癌组织Caveolin-1表达及其在宫颈癌发⽣发