DB35T 1872-2019 鸭3型腺病毒病诊断技术.docxVIP

ICS11.220B41

DB35

福建省地方标准

DB35/T1872—2019

鸭3型腺病毒病诊断技术

Diagnostictechniqueforduckadenovirus3infection

2019-12-19发布2020-03-19实施

福建省市场监督管理局发布

I

DB35/T1872—2019

目次

前言 II

1范围 1

2缩略语 1

3疫病概述 1

4临床诊断 1

5PCR诊断 1

6结果判定 3

附录A（规范性附录）试剂的配制 4

附录B（资料性附录）PCR检测结果电泳图 6

附录C（资料性附录）参考序列 7

II

DB35/T1872—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由福建省农业科学院提出。

本标准由福建省农业农村厅归口。

本标准起草单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福建省动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：万春和、黄瑜、傅光华、李中华、程龙飞、刘荣昌、施少华、陈翠腾、陈红梅、傅秋玲、陈珍、朱春华。

1

DB35/T1872—2019

鸭3型腺病毒病诊断技术

1范围

本标准规定了鸭3型腺病毒病的临床诊断、PCR诊断和结果判定。

本标准适用于鸭3型腺病毒病的临床诊断、实验室诊断和流行病学调查。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DAdV-3：鸭3型腺病毒（DuckAdenovirus3）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSaline）

Tris：三羟甲基氨基甲烷（TrihydroxymethylAminomethane）

3疫病概述

根据国际病毒分类委员会（TheInternationalCommitteeonTaxonomyofViruses）的最新分类：腺病毒科（Adenoviridae）下设5个属，分别为富AT腺病毒属（Atadenovirus）、禽腺病毒属（Aviadenovirus）、鱼腺病毒属（Ichtadenovirus）、哺乳动物腺病毒属（Mastadenovirus）和唾液酸酶腺病毒属（Siadenovirus）。

鸭3型腺病毒病主要发生于40日龄内雏番鸭，临床表现为肝脏肿大、出血，脾脏肿大，胆囊肿大，肾脏肿大、出血。流行病学调查表明，该病发病率20%～50%，病死率60%～70%。

4临床诊断

4.1剖检病变

当鸭出现以下肉眼可见病变时，可作为初步诊断的依据之一：

a)肝脏肿大，表面呈点状或斑状出血；

b)脾脏肿大；

c)胆囊肿大；

d)肾脏肿大，表面出血。

4.2初步诊断

当鸭出现4.1中剖检病变之一时，可做出初步诊断；确诊需进行实验室诊断。

5PCR诊断

5.1主要仪器设备

主要仪器设备如下：

2

DB35/T1872—2019

a)PCR仪；

b)高速台式冷冻离心机；

c)微量移液器；

d)组织匀浆器；

e)电泳仪；

f)电泳槽；

g)紫外凝胶成像系统。

5.2试剂

主要试剂如下：

a)10%十二烷基硫酸钠（配置方法按照附录A中A.1的规定）；

b)蛋白酶K（10mg/mL）（配置方法按照附录A中A.2的规定）；

c)异丙醇；

d)Tris·饱和酚；

e)酚-三氯甲烷-异戊醇（25:24:1）；

f)乙酸钠（3mol/L，pH5.4）；

g)无水乙醇；

h)75%乙醇（配置方法按照附录A中A.3的规定）；

i)核糖核酸酶（20mg/mL）；

j)灭菌双蒸水；

k)PBS（0.01M）（配置方法按照附录A中A.4的规定）。

5.3引物

根据DAdV-3的Fiber2基因设计特异性引物，序列如下：上游引物DAdV-3F：5’-ACACTAGACAACGGAGGCCT-3’。

下游引物DAdV-3R：5’-AATCTTGATACGTAATCATACACA-3’。预期目的片段大小为548bp。

5.4核酸DNA提取

5.4.1酚氯仿法提取核酸DNA

5.4.1.1取2g组织（肝脏、脾脏、肾脏或三者混合物），加入6mLPBS（0.01M）