Z-VAD-FMK抑制凋亡通路对体外培养玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的影响.pdfVIP

局解手术学杂志ＪＲＥＧＡＮＡＴＯＰＥＲＳＵＲＧ２０２２，３１（７）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｊｓｓｘｚｚ．ｃｎ６８５

·基础研究·

ｄｏｉ：１０．１１６５９／ｊｊｓｓｘ．１１Ｅ０２１０４９

ＺＶＡＤＦＭＫ抑制凋亡通路对体外培养玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的影响

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卢美蓉，王静，黄广翅，李桂花，刘秀盈，蔡杏琳（１．海南现代妇女儿童医院妇产科，海南海口５７０１００；２．海南现代

妇女儿童医院检验科，海南海口５７０１００；３．海南医学院第一附属医院产科，海南海口５７０１０２）

［摘要］目的探讨通过泛Ｃａｓｐａｓｅ抑制剂ＺＶＡＤＦＭＫ抑制凋亡通路对体外培养玻璃化冷冻未成熟卵母细胞（ＶＩＯｓ）的

ＤＮＡ完整性和发育潜能的影响。方法取２００只雌性ＩＣＲ小鼠未成熟卵丘—卵母细胞复合体（ＣＯＣｓ）。实验Ⅰ：将未成熟ＣＯＣｓ分

为阴性对照组（ＦＯｓ组，ｎ＝３１，新鲜ＣＯＣｓ）、阳性对照组（ＨＰＯｓ组，ｎ＝３２，过氧化氢暴露ＣＯＣｓ约３ｈ）、２ｈＶＩＯｓ组（ｎ＝３１，玻璃化复

苏ＣＯＣｓ２ｈ）、１８ｈＶＩＯｓ组（ｎ＝３２，玻璃化复苏ＣＯＣｓ１８ｈ），探讨玻璃化冷冻对未成熟卵母细胞凋亡通路的影响。实验：将未成熟

Ⅱ

ＣＯＣｓ分为ＶＩＯｓ（－／－）组（ｎ＝３６，未加入ＺＶＡＤＦＭＫ）、ＶＩＯｓ（＋／－）组（ｎ＝３７，仅在玻璃化冷冻复苏培养基中添加ＺＶＡＤＦＭＫ）和

ＶＩＯｓ（＋／＋）组（ｎ＝３４，在玻璃化冷冻复苏培养基和复苏后培养基中均添加ＺＶＡＤＦＭＫ），复苏后孵育１８ｈ进行染色，探讨

ＺＶＡＤＦＭＫ对凋亡标志物［未成熟卵母细胞ＤＮＡ片段化（ＴＵＮＥＬ阳性卵母细胞百分比）、Ｃａｓｐａｓｅ活性］的影响。实验Ⅲ：将未成熟

ＣＯＣｓ分为ＦＯｓ组（ｎ＝１３０）、ＶＩＯｓ（－／－）组（ｎ＝１２９）和ＶＩＯｓ（＋／＋）组（ｎ＝１２８），分组操作同上，分析ＺＶＡＤＦＭＫ对ＶＩＯｓ体外

发育潜能的影响。结果实验结果显示，ＨＰＯｓ组、１８ｈＶＩＯｓ组未成熟卵母细胞ＤＮＡ片段化比例高于ＦＯｓ组（Ｐ＜０．０５）；１８ｈ

Ⅰ

ＶＩＯｓ组未成熟卵母细胞ＤＮＡ片段化比例高于２ｈＶＩＯｓ组（Ｐ＝０．０２３），低于ＨＰＯｓ组（Ｐ＝０．００４）；ＨＰＯｓ组、２ｈＶＩＯｓ组和１８ｈ

ＶＩＯｓ组Ｃａｓｐａｓｅ活性均高于ＦＯｓ组（Ｐ＝０．００１），但是ＨＰＯｓ组、２ｈＶＩＯｓ组和１８ｈＶＩＯｓ组Ｃａｓｐａｓｅ活性比较，差异无统计学意义

（Ｐ＞０．０５）。实验Ⅱ结果显示，与ＶＩＯｓ（－／－）组相比，ＶＩＯｓ（＋／－）组未成熟卵母细胞ＤＮＡ片段化比例较低（Ｐ＝０．００７）；

ＶＩＯｓ（＋／＋）组未成熟卵母细胞ＤＮＡ片段化比例和Ｃａｓｐａｓｅ活性低于ＶＩＯｓ（＋／－）组和ＶＩＯｓ（－／－）组（Ｐ＜０．００１），但

ＶＩＯｓ（＋／－）组和ＶＩＯｓ（－／－）组Ｃａｓｐａｓｅ活性比较差异无统计学意义（Ｐ＝０．５８８）。实验Ⅲ结果显示，ＶＩＯｓ（＋／＋）组成熟率、受

精率与ＦＯｓ组和ＶＩＯｓ（－／－）组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），但ＶＩＯｓ（＋／＋）组和ＶＩＯｓ（－／－）组闭锁率高于ＦＯｓ组

（Ｐ＜０．００１）；ＶＩＯｓ（－／－）组和ＶＩＯｓ（＋／＋）组５～８细胞、９～１６细胞胚胎发育率均低于ＦＯｓ组（Ｐ＜０．００１）；在胚胎发育后期，

ＶＩＯｓ（－／－）组和ＶＩＯｓ（＋／＋）组均无囊胚形成，与ＦＯｓ组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论玻璃化冷冻提高了ＶＩＯｓ的

凋亡标志物水平，而ＺＶＡＤＦＭＫ能够抑制ＤＮＡ损伤和Ｃａｓｐａｓｅ活性，但其可能并不是胚胎发育的决定因素。

［关键词］细胞凋亡；超低温保存；玻璃化冷冻；未成熟卵母细胞；ＤＮＡ完整性；发育潜能

［中图分类