包涵体的形成原因及其处理方法 .pdfVIP

・・《上海畜牧兽医通讯》年第期

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(河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002)

世纪年代以来基因重组技术得到很大的发展越防止水解酶作用的试剂如酶的抑制剂、(乙二胺四乙

2090,,,EDTA

())()

来越多的工程菌或工程细胞被构建。大肠杆菌表达系统酸。破菌的方法很多主要包括以下几种渗透破碎法

,:1:

这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。()冷热交替

是目前最常用的外源蛋白表达系统。大肠杆菌由于遗传背2

法把待碎样品投入℃左右水中维持数分钟后取出投入冰

景清楚容易培养以及有大量可供选择的克隆载体与表达载:90

,

〔〕

1浴内可使大部分细胞破碎。可用于提取蛋白质和核酸。

体使之成为人们克隆表达外源基因的主要细菌。然而,

,,

()反复冻融法把待碎样品冷却到℃冻固后取出缓

在实践过程中一个十分棘手的问题是许多外源基因在大肠3:-20,,

,

慢解冻如此反复操作细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破导

杆菌、酵母等表达体系中表达时往往以包涵体形式存在高,,

,,

致部分细胞及胞内的颗粒破碎但也可使生物活性物质失

效表达的重组蛋白在细胞内凝集形成不溶的、无活性的固,

,

活。这种方法虽简单方便但对温度变化敏感的蛋白质却不

(),

体颗粒。一般含有质量分数以上的重组蛋白其余

50%