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烟草C3HC4型锌指蛋白的原核表达及转基因植株功能研究
伍文宪;杨秀芬;刘勇;邱德文
【摘要】植物中C3HC4型RING锌指蛋白在泛素化、光形态建成、抗逆及生长
发育等过程中均起到非常重要的作用。首次从本生烟中扩增获得一个锌指蛋白基因
的完整阅读框，编码203个氨基酸，含有C3HC4型锌指结构域，命名为
NbZFP1。将NbZFP1基因分别克隆到原核表达系统载体pGEX-6P-2以及
pMAL-C2X中，成功构建了重组表达载体pGEX-6P-2-NbZFP1与pMAL-C2X-
NbZFP1，经IPTG获得了大量可溶性表达的NbZFP1融合蛋白。将NbZFP1基
因克隆于植物表达载体pBI121中，通过农杆菌介导法获得转基因烟草，PCR检
测及Southernblot分析表明NbZFP1基因已整合到烟草基因组中，转NbZFP1
基因烟草表现出株型紧凑，节间缩短，茎干粗壮和对TMV抗性增强。%C3HC4-
typeRINGfingergenescomprisealargefamilyintheplantkingdomand
playimportantrolesinvariousphysiologicprocessesofplantlife.Inthis
study,azincfingergenewasisolatedfromNicotianabenthamiana.
Sequenceanalysisindicatedthatthegeneencodesa24kDproteinwith
203aminoacidsandcontainsonetypicalC3HC4zincfingerdomainand
namedNbZFP1.TheentirecodingregionofNbZFP1genewasthencloned
intothebacterialexpressionvectorspGEX-6P-2andpMAL-C2X.AfterIPTG
induction,therecombinantproteinwasanalyzedbySDS,which
showedthattheexpectedproteinwasexpressedatahighlevelinbacterial
cells.NbZFP1genewasclonedintotheover-expressionvectorpBI121,and
thentransferedintoNicotianabenthamianathroughAgrobacterium
tumefacien-mediatedtransformation.AccordingtoPCRandSouthernblot
detection,NbZFP1genewassuccessfullyintegratedintoNicotiana
benthamianagenome.Regenerationplantsshowedtypecompactness,
internodeshortenandstemsturdy,alsoenhanceddiseaseresistance
againsttobaccomosaicvirus(TMV).
【期刊名称】《生物技术通报》
【年(卷),期】2014(000)007
【总页数】6页(P100-105)
【关键词】锌指蛋白;重组表达;转基因烟草;抗病性
【作者】伍文宪;杨秀芬;刘勇;邱德文
【作者单位】中国农业科学院植物保护研究所，北京100081;四川省农业科学院
植物保护研究所，成都610066;中国农业科学院植物保护研究所，北京100081;
四川省农业科学院植物保护研究所，成都610066;中国农业科学院植物保护研究
所，北京100081
【正文语种】中文
锌指蛋白是真核生物基因组中最丰富的一类转录因子，最初于1983年被发现存在
于非洲爪蟾卵母细胞的转录因子TFIIIA中［1]，锌指结构由多
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