华支睾吸虫病诊断抗原的筛选及ELISA诊断试剂盒的研制的开题报告.pdfVIP

华支睾吸虫病诊断抗原的筛选及ELISA诊断试剂盒的研制

的开题报告

一、研究背景和意义

华支睾吸虫病是人畜共患的寄生虫病，广泛分布于亚洲、非洲和南美洲等地。其主要

传播途径是通过食用未煮熟或未煮透的淡水鱼类感染。病人主要表现为肝功能异常、

腹水、黄疸等症状，严重时可出现肝硬化和肝癌等并发症。目前，华支睾吸虫病的诊

断方法主要是通过病人血液或粪便中检测虫卵进行诊断，这种方法不仅存在误诊率高，

而且还需要人工显微镜检查，影响诊断效率。

因此，开发一种敏感、快速、准确的诊断试剂盒，对于华支睾吸虫病的早期诊断和治

疗具有重要的意义。

二、研究内容和目标

本研究旨在筛选出适于华支睾吸虫病抗原检测的IgG单克隆抗体，利用该抗体研制华

支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒。具体研究内容包括：

1.病人血清样本的筛选：筛选出具有明确诊断的病人血清样本。

2.抗原的制备：利用华支睾吸虫成虫体提取抗原。

3.重组抗原的制备：利用基因工程技术制备华支睾吸虫病抗原。

4.单克隆抗体的制备：通过酶联免疫吸附试验等方法，筛选出适于华支睾吸虫抗原检

测的IgG单克隆抗体。

5.试剂盒的制备：利用该单克隆抗体研制华支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒，并进行初

步验证。

研究目标是成功筛选出适用于华支睾吸虫病抗原检测的IgG单克隆抗体，并研制出华

支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒。

三、研究方法和步骤

1.病人血清样本的收集和筛选：利用常规方法采集病人外周血，进行病人诊断和病程

观察，筛选出符合分析要求的病人血清样本。

2.抗原的制备：采用华支睾吸虫成虫体提取抗原，液氮冻存处理。

3.重组抗原的制备：采用PCR扩增华支睾吸虫基因，克隆到表达载体中，大量表达纯

化。

4.单克隆抗体的制备：采用酶联免疫吸附试验等方法，筛选出适于华支睾吸虫抗原检

测的IgG单克隆抗体。

5.试剂盒的制备：利用该单克隆抗体研制华支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒。包括：

（1）涂层抗原的制备：液氮冻存的华支睾吸虫抗原，充分溶解并浓缩，铺涂于96孔

微板中。

（2）制备酶标记免疫球蛋白：将筛选出的IgG单克隆抗体标记以辣根过氧化物酶。

（3）试剂盒的组装：将制备好的涂层抗原、酶标记免疫球蛋白和其它所需试剂分装到

试剂盒中。

6.试剂盒初步验证：对病人血清样本进行ELISA检测，验证试剂盒在人群中的应用价

值。

四、预期成果和研究意义

预期成果有：

1.筛选出适用于华支睾吸虫病抗原检测的IgG单克隆抗体。

2.制备出华支睾吸虫病ELISA诊断试剂盒。

3.验证试剂盒在人群中的应用价值。

研究意义在于：

1.为华支睾吸虫病的早期诊断提供了一种新方法，提高了诊断效率。

2.为病人的早期治疗提供了重要的支持。

3.通过本研究，还可以为其它寄生虫病的诊断和治疗提供经验和借鉴。