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细胞因子蛋白含量（Lowry法）测定标准操作规程

依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。

范围：适用于细胞因子原液的检定。

目的：检测细胞因子原液的蛋白质含量。

原理：lowry法是在双缩脲反应的基础上发展起来的。是由试剂A和试剂B二

部分组成。试剂A是碱性铜试剂；试剂B含有磷钨酸和磷钼酸。在碱性条件下，蛋

白质与碱性铜试剂产生双缩脲反应，形成紫红色的蛋白质与铜的复合物，然后此复

合物中的酪氨酸和色氨酸残基还原试剂B中的磷钼酸-磷钨酸，产生深兰色，为钼兰

和钨兰的混合物，其呈色强度与蛋白质浓度呈正相关，可用比色法测定蛋白质浓度。

内容：

1材料

1．1样品：经二人核对好批号后测定。

1．2试剂

钨酸钠NaWO·2HO化学纯

242

钼酸钠NaMO·2HO分析纯

2O42

磷酸HPO分析纯

34

浓盐酸HCl分析纯

硫酸锂LiSO分析纯

24

酒石酸钾钠CHOKNa·4HO分析纯

4462

硫酸铜CuSO分析纯

4

氢氧化钠NaOH分析纯

无水碳酸钠NaCO分析纯

23

溴水Br分析纯

2

1．3标准品：由中国药品生物制品检定所提供。

1．4注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版要求。

1．5其它材料：试管架、吸球、硫酸纸、药勺、记号笔、玻璃比色杯。

1．6仪器、设备

紫外分光光度仪,UV-265

扭力天平，TN100B

冰箱，BOD-170A

1．7器皿

试管、量筒（250ml、100ml）、玻璃瓶（500ml、250ml）、棕色磨口瓶（50ml、

500ml）、吸管（1ml、5ml、10ml），以上均由本室洗刷组处理干净。

2方法

2．1准备工作

2．1．1工作环境：控制区确认场地清场合格，摘下“清场合格”标志牌,挂上“使

用中”标志牌。

2．1．2调试仪器设备

2．1．2．1紫外分光光度仪，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。

2．1．2．2扭力天平，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。

2．1．2．3冰箱，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。

2．1．3试剂配制

2．1．3．1试剂A：用扭力天平准确称取20克NaCO溶于500ml0.2mol/LNaOH

23

溶液中，另将1克CuSO·5HO溶于100ml2%酒石酸钾钠溶液中，临用前将二种

42

溶液按50：1的比例在250ml洁清的玻璃瓶中混合均匀，二人复核，贴签，标明溶

液的名称、浓度、体积、批号、配制日期。放置30分钟，即为试剂A。

2．1．3．2试剂