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血液实验室作业指导书

河北省张家口市第二医院检验科

编制：

审核：

批准：

河北省张家口市第二医院

凝血酶原时间-纤维蛋白原（PT-FIB）测定

1.实验原理

本实验可同时测定凝血酶原时间（PT）和纤维蛋白原（FIB）浓度。

原理：确定量的抗凝血浆（50微升）样本经一定时间加温后，将组织凝血活酶、钙离子加入其中，激活外源凝血途径，产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆，测定其凝固过程中90o散射光变化，然后通过标准曲线求出凝血酶原时间，再通过参数计算得出凝血酶原活动度及INR值。

在检测PT的同时，血浆浊度的变化与血浆中FIB的含量成正相关，通过测定凝固终点和起始点光散射强度的差值，再根据试验前已经做出的由不同已知FIB浓度与相应的光散射差值关系的标准曲线即可推测出FIB的浓度。

2.标本采集

2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。

2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。

3.标本存放：全血贮存在4～10oC不超过2小时，最好1小时内(3000r/min×15min)分离血浆，此血浆在室温22～24oC下可存放2小时，在2～4oC可存放4小时，在-20oC可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在-70oC可存放6个月。

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37oC水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。

4.标本运输：低温条件下运输。

5.标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。

6.实验材料：

6.1每个试剂均购自德国DadeBehringMarburg公司。

1）PT-FIB测定试剂盒（代号P/N:

兔脑促凝血激酶 10mLX8瓶

2）定标血浆 CalibrationPlasma（代号P/N

3）参比液ReferenceEmulsion（代号P/N:9756900）

4）因子稀释液Factordiluent（代号P/N:9757600）

5）正常质控血浆 Normalcontrolplasma（代号P/N

6）低水平质控血浆 AbnormalcontrolplasmalevelI/Low（代号P/N:

7）高水平质控血浆 AbnormalcontrolplasmalevelII/High（代号P/N:

注：促凝血酶原激酶

当用不同的促凝血酶原激酶，或用不同的检测方法（手工、半自动、全自动）做PT测试时，其秒数结果将会有较显著的差异。而对于口服抗凝药的病人来说，需要一个能进行比较的PT结果。

国际血液血标准委员会（ICSH）及国际血栓与止血委员会（ICTH）建议，根据试剂的ISI值（国际敏感度指数）计算INR值（国际标准化比值），并以INR值作为PT的通用结果报告。

根据经验及文献报道，试剂的灵敏度一手测试方法及机器自动化程度的影响。但美国贝克曼库尔特公司提供的PT-FIB试剂，每一批号都经过了严格的测试，与ICSH及ICTH的参考品有很好的相关性，其ISI值均注明在试剂盒说明书中。在ACL7000上，当输入试剂的ISI值后，机器会自动给出INR值。

INR=(PTRatio)ISI

6.2试剂准备

用8mLNCCLSII型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶促凝血激酶，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

6.3试剂保存

未开封的试剂可保存在2～8oC至试剂盒上标明的有效期。

试剂溶解后，于原瓶中2～8oC，3天内有效；在ACL7000上（15oC），8小时有效。建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2～8oC。

7.仪器设备：

7.1仪器名称：syxmexCA7000全自动血凝仪

7.2仪器厂家：日本希森美康公司

7.3仪器型号：CA7000

7.4仪器技术参数：

7.4.1试剂位：18个，具冷藏功能。

7.4.2样本位：40个，可通过换盘连续添加。

7.5仪器校准程序：

7.5.1校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。

7.5.2校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。

8.操作步骤：

8.1开机：CA7000的开关在仪器的右侧。开机后仪器自检，当屏幕上边显示Ready时可进行试检

8.2洗针：在主屏幕上选RinseProbe键，然后按Execute进行洗针

8.3检查消耗品：

1.准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的