DB22T 3192-2020 西瓜细菌性果斑病诊断及防治技术规程.docxVIP

ICS65.020B16

DB22

吉林省地方标准DB22/T3192—2020

西瓜细菌性果斑病诊断及防治技术规程

Codeofpracticefordiagnosisandintegeratedcontrolbacterialfruitblotchdiseaseofwatermelon

2020-11-23发布2020-12-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

I

DB22/T3192—2020

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：吉林农业大学、中国农业科学院植物保护研究所、大安市农业技术推广中心、双辽县园艺特产局、长岭县园艺特产站。

本文件主要起草人：白庆荣、杨玉文、赵廷昌、王雪、高洁、杨丽娜、李红艳、付国、许景光、陈悦、孙东晗、孙于淼、吴佳鸿、常哈拿。

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DB22/T3192—2020

西瓜细菌性果斑病诊断及防治技术规程

1范围

本文件规定了西瓜细菌性果斑病的症状观察、田间快速检测、病原菌分离培养检测、PCR检测及病害综合防治。

本文件适用于西瓜噬酸菌引起的西瓜细菌性果斑病的诊断及防治。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则NY/T1276农药安全使用规范总则

NY/T2919-2016瓜类果斑病防控技术规程

3术语及定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

西瓜细菌性果斑病bacterialfruitblotchofwatermelon

由西瓜噬酸菌（Acidovoraxcitrulli）侵染西瓜引起的一种细菌性病害，病菌在西瓜整个生育期内均可侵染，主要为害子叶、真叶、茎蔓和果实。

4病害诊断

4.1病原和病害症状

病害典型症状及病原相关信息见附录A。

4.2症状观察

4.2.1幼苗期

幼苗期子叶发病，初期出现水浸状褪绿斑，后渐变为暗棕色，常沿主脉逐渐发展为不规则的暗绿色至褐色、黑褐色坏死病斑。高温高湿情况下，病斑处有菌脓溢出，干后形成白色发亮的菌膜。

4.2.2成株期

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真叶发病，初期形成水渍状暗棕色小斑点，病斑较小，周围有黄色晕圈，病斑通常沿叶脉发展，叶片正面形成褐色多角形、条形或不规则形病斑。在高湿的环境下，叶片背面病斑处可溢出菌脓，干后呈白色膜状。此病亦危及叶柄和茎蔓，病叶很少脱落。

4.2.3果实

4.2.3.1果实发病初期为水渍状斑点，病斑迅速扩展，边缘不规则，颜色加深呈暗橄榄绿色，并向果肉腐烂蔓延；湿度大时病斑上产生透明黏稠状物，干燥后呈白色膜状或粉状物。

4.2.3.2早期形成的病斑老化后表皮龟裂，常溢出黏稠、透明的琥珀色菌脓，果实很快腐烂。

4.3田间快速检测

对疑似果斑病症状的幼苗、叶片、果实等发病部位可直接利用商品化胶体金试纸条进行快速检测，按照说明书进行操作及结果判定。结果为阳性则初步判定为西瓜细菌性果斑病。

4.4病原菌实验室检测

4.4.1显微镜检测

在显微镜下观察新鲜病害样品病健交界处组织有无喷菌现象，若有喷菌现象，则认定为细菌病害。

4.4.2病菌分离培养

选取具有喷菌现象的病健交界处组织，切成3mm×3mm左右的小块，用75%的乙醇表面消毒40s～60s，用无菌水清洗3次，然后将其移至装有1mL无菌水的灭菌培养皿，用灭菌剪刀将其剪碎，制成细菌悬浮液。用灭菌接种环蘸取细菌悬浮液在含有50μg/mL氨苄青霉素的营养琼脂培养基（NA）半选择平板培养基上划线分离，28℃恒温培养48h，长出的菌落初步认定为西瓜噬酸菌。

4.5PCR检测

4.5.1DNA模板制备

将4.3.2中分离培养的细菌菌株用无菌水稀释成≥105cfu/mL的菌悬液做模板。

4.5.2PCR凝胶电泳检测4.5.2.1特异性PCR引物

WFB1/WFB2(5’-GACCAGCCACACTGGGAC-3’/5’-CTGCCGTACTCCAGCGAT-3’)。

4.5.2.2PCR反应体系

10×PCR缓冲液2.5