DB22T 3386-2022 小球藻发酵培养技术规范　　.docxVIP

ICS65.150CCSB52

22

吉林省地方标准

DB22/T3386—2022

小球藻发酵培养技术规范

Thetechnicalspecificationforfermentationcultureoffreshwaterchlorellavulgaris

2022-06-23发布2022-07-23实施

吉林省市场监督管理厅发布

DB22/T3386—2022

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。

本文件起草主要单位：吉林农业大学，吉林省水产技术推广总站、通化师范学院。

本文件主要起草人：张东鸣、陈玉珂、蔺丽丽、王秋举、郭志欣、刘洪建、赵云龙、高永生。

DB22/T3386—2022

1

小球藻发酵培养技术规范

1范围

本文件规定了小球藻（Chlorellavulgaris）发酵培养的仪器设备与耗材，培养基，培养，测定生物量和采收。

本文件适用于淡水小球藻设施发酵培养。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB11607渔业水质标准

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

扩大培养expandculture

培养基中接种少量的藻种，在适宜环境条件（温度、盐度、光照、pH值等）下，藻液达到一定的

浓度后，一次性采收或作进一步扩大培养的过程。

发酵培养fermentationculture

小球藻通过生物氧化反应获得能量以维持藻细胞生长的过程。

4仪器设备与耗材

仪器设备

小球藻发酵培养仪器设备应满足下列要求：

a)发酵罐,容量不低于50L；

b)恒温干燥箱，不低于2000W；

c)高压灭菌器,灭菌体积不低于50L；

d)高速离心机，转速不低于5000r/min，离心体积不小于500mL；

e)充气泵，功率大于200W。

耗材

玻璃三角烧瓶，培养皿，离心管。

2

DB22/T3386—2022

5培养基

5.1扩大培养用BG-11培养基，主要成分见表1。

表1BG-11培养基组成

贮存液

配制体积(mL)

成分

含量(g)

工作液体积(mL)

1

1000

NaNO?(+N)/NaCl(-N)

30/20.6

50

K?HPO?·3H?O

0.80

Na?CO?

0.40

2

100

柠檬酸

0.30

2

柠檬酸铁铵

0.30

EDTA-Na?

0.05

3

100

CaCl?·2H?O

1.80

2

4

100

MgSO?·7H?O

3.75

2

5

1000

H?BO?

2.86

1

MnCl?·4H?O

1.81

CuS0?·5H?O

0.079

Na?Mo0,·2H.0

0.391

Co(NO?)?·6H?O

0.04947

ZnS04·7H?O

0.222

6°

1000

HEPES缓冲液

119.15

40

贮存液1用2mol/L的NaOH调pH到7.4～8.0;贮存液2易生菌，高压灭菌后保存于4℃;

“贮存液6为保种时用，平时培养可不加。

5.2发酵培养的培养基主要成分见表2。

表2发酵培养基组成

贮存液

成分

含量

1

葡萄糖

41.53g/L

2

尿素

4.14g/L

3

KHPO?

0.7g/L

4

MgS0?·7HO

0.7g/L

5

Na?HPO?·12H?O

1.84g/L

6

CaCl,母液

5mL

7

Fe-EDTA母液

15mL

8

微量元素母液

1.84mL

DB22/T3386—2022

6培养

6.1水质

水质符合GB11607的要求。

6.2扩大培养

6.2.1藻种

小球藻纯度≥99.99%。

6.2.2接种

无菌环境下，将已无菌的600mLBG-11培养基装入1L已灭菌处理的玻璃三角烧瓶中，然后将

200mL密度达到10?ind/mL的小球藻接种于BG-11培养基中。

6.2.3培养条件

pH6.5,培养温度28℃,充气量1.5L/min,培养时间为96h。

6.3发酵培养

6