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生化需氧量(BOD)的测定

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（五日培养法）

一．实验目的

1．了解生化需氧量（BOD5）的含义。

2．掌握五日培养法测定生化需氧量的基本原理。

3．熟练掌握碘量法测定DO的操作技术。

4．明确化学需氧量和生化需氧量的相关性。

二．实验原理

五日培养法也称标准稀释法或稀释接种法。其测定原理是：水样经稀释后，在

20℃±1℃条件下培养5天，求出培养前后水样中溶解氧含量，二者的差值为

BOD5。

如果水样五日生化需氧量未超过7mg/L，则不必进行稀释，可直接测定。很多

较清洁的河水就属于这一类水。溶解氧测定方法一般用碘量法。

三．实验仪器、设备

1．20℃±1℃恒温培养箱。

2．5～20L细口玻璃瓶。

3．250mL溶解氧瓶：带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口。

4．1000mL量筒。

5．玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长20cm，棒的底端固定一个直径比量筒

直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板。

6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。

四．实验试剂

1．磷酸盐缓冲溶液：将0.85g磷酸二氢钾（KH2PO4）、2.175g磷酸氢二钾

（K2HPO4）、3.34g磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）和0.17g氯化铵（NH4Cl）

溶于水中，稀释至100mL。此溶液的pH应为7.2。

2．硫酸镁溶液：将2.25g硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至100mL。

3．氯化钙溶液：将2.75g无水氯化钙溶于水中，稀释至100mL。

4．氯化铁溶液：将0.025g氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于水中，稀释至100mL。

5．盐酸溶液（0.5mol/L）：将4mL（ρ=1.18g/mL）盐酸溶于水，稀释至100mL。

6．氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：将2g氢氧化钠溶于水，稀释至100mL。

7．亚硫酸钠溶液（c1/2Na2SO3=0.025mol/L）：将0.1575g亚硫酸钠溶于水，稀

释至100mL。此溶液不稳定，需当天配制。

8．葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸

（HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH）在103℃干燥1h后，各称取15mg溶于水

中，移入100mL容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。此标准溶液临用前配制。

9．稀释水：在5～20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。然后

用无油空气压缩机或薄膜泵将此水曝气2～8h，使水中的溶解氧接近于饱和，也

可以鼓入适量纯氧。瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱中放置

数小时，使水中溶解氧含量达8mg/L左右。临用前于每升水中加入氯化钙溶液、

氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。稀释水pH应

为7.2，其BOD5应小于0.2mg/L。

10．接种液：可选用以下任一方法获得适用的接种液。

①城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上层清液供用。

②表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静

置10min，取上清溶液供用。

③用含城市污水的河水或湖水、污水处理厂的出水。

④当分析含有难于降解物质的废水时，在排污口下游3～8km处取水样作为废

水的驯化接种液。如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，

每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水

的微生物大量繁殖。当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现

突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。一般驯化过程需要3～

8天。

11．接种稀释水：取适量接种液，加于稀释水中，混匀。每升稀释水中接种液加

入量为：生活污水1～10mL；表层土壤浸出液20～30mL；河水或湖水10～100mL。

接种稀释水pH应为7.2，其BOD5在0.3～1.0mg/L之间为宜。接种稀释水配制

后应立即使用。

五．实验步骤

1．水样的预处理：

①水样的pH值若超出6.5～7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调pH值近

于7，但用量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓

度的碱或酸液进行中和。

②