土壤中钩蚴分离方法.pptVIP

一、试验原理钩虫卵在土壤中发育到丝状蚴后具有向温性，而自由生活的线虫没有。将土壤平铺于铺有两层棉纸的分样筛中，加温水至刚好淹没棉纸。利用土壤中钩蚴的向温性特点，使土壤中钩蚴穿过棉纸层，进入温水中。再将温水沉淀，获得含有钩蚴的沉淀液，镜检鉴别种类。二、试验材料主要用具：分样筛（30目，高50mm，内径171mm）固定圈（中空筒状，高50mm，外径168mm）烧杯（500ml）棉纸搪瓷盘（20×30）平皿水浴箱/温箱三角量杯（500ml）其他用具：土铲大镊子记号笔保鲜袋温度计三、土壤样本的采集采样要求：施用粪便作为肥料的菜地前一段时间（至少5天）未喷洒杀虫剂上午10点以前2～3cm表层土﹥300g（烧杯中达到300ml刻度线）登记采样信息（编号、采样点、种植类型、户主姓名、采样份数等）四、试验步骤1、将三层棉纸剪为圆形，半径比分样筛大出约5cm，平铺于分样筛上。四、试验步骤2、将事先取样的土壤拣去植物残渣及石块，敲碎团块，均匀铺于分样筛中棉纸上。用烧杯量取约300ml土样，重量约为300g铺土时，用镊子拨开两个洞，露出底部棉纸，以便观察加水位置。四、试验步骤3、将铺好的分样筛放入搪瓷盘（或不锈钢脸盆）中，加入45℃（实际为47℃）5%的盐水，至湿润土壤并恰好没过棉纸为止。加水时要微微晃动分样筛，以便观察水位。注意：晃动时动作要轻缓，以免导致棉纸破裂或土样溅出。注意：由于土壤可以吸水，因此观察水位时要等土壤充分吸水湿润后在观察！四、试验步骤4、将搪瓷盘放入水浴箱（温箱/培养箱）中，水温控制在45℃左右，放置1.5小时。1.5h注意：控制水浴箱中水位！若水位过高则容易引起搪瓷盘晃动或漂浮，导致土壤溅出或瓷盘倾覆。四、实验步骤5、取出搪瓷盘，取走分样筛，将搪瓷盘中水倒入三角烧瓶中，自然沉淀15分钟。移走！注意：动作轻柔！棉纸经长时间浸泡，较易破裂！四、试验步骤6、缓缓弃去上清，留取底部50ml或更少液体，倾入平皿中，解剖镜下观察和计数。倾倒时切忌速度过快！量杯底部剩余约100ml液体时停止倾倒，用大吸管缓慢吸取残余上清，直至余下50ml。土样的采集：近一段时间内没有喷过杀虫剂，上午10点前完成采集。若分离后水太浑浊，可将沉淀物倒入分离装置重复上述步骤进行二次分离。棉纸：5层棉纸的去除自由线虫的效果是2层棉纸的1.5倍，3层棉纸在现场的可操作性更强。分离液：相比自来水作为分离液，4.8%～5.2%的盐水作为分离液去除自由线虫的效果是自来水的1.8倍，且分离后自由线虫无明显活性。倾倒上清液时，避免液体回流，影响沉淀效果。五、注意事项六、试样灭活试验结束后，残余土壤以及液体可用84消毒液灭活，亦可用开水浸泡灭活，之后可作为一般试验垃圾处理。