《医学微生物学实验》8.沉淀反应-教学课件（非AI生成）.ppt

间接法

indirectELISA检测抗体酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)空白阴性阳性待测洗涤液1滴1滴50ul间接ELISA法检测血清抗-HBsAb步骤1.加血清及对照 第1孔，空白对照，加洗涤液1滴 第2孔，阴性对照，加阴性对照血清1滴第3孔，阳性对照，加阳性对照血清1滴第4孔，待检血清，加待检血清50?l2.加酶结合物加入酶结合物1滴（空白孔不加），混匀，37?C30min3.洗板弃去孔内液体，注满洗涤液，静置5sec，甩干，重复3次。4.显色每孔加显色液A、B各1滴，混匀，封板，37?C15min5.观察结果医学免疫学实验第8次实验沉淀反应1.录像2.双向免疫扩散试验（操作），对流免疫电泳（示教）3.抽血3ml（每组一人，下次实验用）沉淀反应概念：可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液、组织浸液、微生物蛋白等）与相应抗体结合后出现沉淀物称沉淀反应。类型：★单向免疫扩散★免疫比浊法★双向免疫扩散★对流免疫电泳单向免疫扩散

singleimmunodiffusion抗原的定量技术Method:Ab-ingelAg-inwellAgConcentrationDiameterAgAgAgAg？Abingel单向琼脂扩散试验双向免疫扩散

doubleimmunodiffusion抗原或抗体的定性、组成和两种抗原的相关性分析。抗原抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向四周扩散，;两者相遇时在比例合适处形成沉淀线。抗原抗体双向免疫扩散实验步骤：1.琼脂板的制备(5ml)；2.打孔；3.加样；（中央孔加抗AFP血清，1、4孔加阳性对照，2、3、5、6孔加待检）4.湿盒扩散；37?C，24h412356123564双向琼脂扩散试验对流免疫电泳检测血清中AFP1、3孔加抗AFP抗体2孔，AFP阳性对照血清4孔，待检血清pH8.6巴比妥缓冲液1234+-对流免疫电泳第9次实验免疫标记技术

1.录像（免疫标记技术）2.ELISA(操作，间接法检测抗-HBs）免疫标记技术概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术称为免疫标记技术。常用方法有免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检测技术等。特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、定位。★免疫印迹法★斑点金结合试验★放射免疫测定法★酶免疫测定法（ELISA）★免疫荧光技术常用免疫标记技术：直接免疫荧光directimmunofluorescence(DIF)荧光素标记抗体直接检测组织表面抗原。AgFluorochromeLabeledAbTissueSection常用的荧光素主要有两种异硫氰酸荧光素(FITC)藻红蛋百(PE)罗丹明（RB200)间接免疫荧光,Indirectimmunofluorescence,IIF一抗与标本中抗原结合，再用荧光素标记的二抗进行检测。AgFluorochromeLabeledAnti-IgTissueSectionUnlabeledAb免疫荧光技术酶联免疫吸附试验

ELISA(Emzyme-LinkedImmunosorbentAssay酶标记抗原或抗体的方法，此法是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合的技术，可敏感地检测体液中微量的特异性抗体或抗原。1.抗原或抗体吸附到固相载体,加入待测抗体或抗原2.酶标抗原或抗体与已结合的待测抗体或抗原反应3.加入酶底物，产生有色物质，颜色的深浅与量呈正比酶联免疫吸附试验

Enzyme-LinkedImmunosorbentAssays(ELISA)用酶标记抗原(或抗体)检测抗体(或抗原)。检测敏感度：ng-pg/ml固相载体：聚苯乙烯微量反应板标记酶辣根过氧化物酶(HRP)碱性磷酸酶(AP)酶标仪读OD值直接法

directELISA检测抗原双抗体夹心法

SandwichELISA检测抗原