miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子基因表达的靶向调控作用.pdfVIP

miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子基因表达的靶向

调控作用

余丹纯;聂玉强;黄耀星;孙小娟

【摘要】目的探讨miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子(activated

leukocytecelladhesionmolecule,ALCAM)基因表达的靶向调控作用.方法运用

生物信息学方法预测靶向调控ALCAM的miRNA;应用SYBRGreen荧光定量

PCR检测各个人胃癌细胞株中ALCAMmRNA的表达情况,确定实验细胞株;通过

PCR扩增合成含有miR-9结合位点的ALCAMmRNA3端非编码区(ALCAM

3UTR)片段和在miR-9结合位点进行突变的ALCAM-mutmRNA3UTR,测序鉴

定后将其克隆至报告基因载体psiCHECK-2质粒,分别命名为psiCHECK-2-

ALCAM和psiCHECK-2-ALCAM-mut;分组转染重组质粒和miRNA,双荧光素酶

报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达,SYBRGreen荧光定量PCR和

Westernblotting检测ALCAMmRNA及蛋白表达水平.结果生物信息学分析筛

选发现miR-9可能靶向调控ALCAM;ALCAMmRNA在各胃癌细胞株中的表达量

明显高于人正常胃黏膜GES-1细胞株,且SGC-7901细胞株ALCAMmRNA的表

达量最高(P＜0.05),确定为实验细胞株;测序验证ALCAM3UTR和ALCAM-

mut3UTR经PCR扩增合成成功;psiCHECK-2-ALCAM质粒共转染miR-9

mimics细胞组的相对荧光素酶活性较psiCHECK-2-ALCAM质粒共转染miR-NC、

miR-9inhibitor细胞组或空白对照组明显降低(P＜0.05),且该组细胞ALCAM

mRNA和蛋白的表达明显降低(P＜0.05);而psiCHECK-2-ALCAM-mut质粒共转

染miR-NC、miR-9mimics或miR-9inhibitor细胞组的相对荧光素酶活性与空

白对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论在SGC-7901中,miR-9通过与

ALCAMmRNA3UTR结合而负性调控ALCAM基因的表达.

【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》

【年(卷),期】2019(028)001

【总页数】4页(P48-51)

【关键词】胃癌;双荧光素酶报告基因系统;逆转录聚合酶链反应;蛋白质印迹

法;miR-9;活化白细胞黏附分子

【作者】余丹纯;聂玉强;黄耀星;孙小娟

【作者单位】广州市第一人民医院消化内科,广东广州510180;广州市第一人民医

院消化内科,广东广州510180;广州市第一人民医院消化内科,广东广州510180;广

州市第一人民医院消化内科,广东广州510180

【正文语种】中文

【中图分类】R735.2

活化白细胞黏附分子(activatedleukocytecelladhesionmolecule，ALCAM)也

称CD166，是一种广泛存在于人体各个组织器官的糖蛋白，是免疫球蛋白超家族

的成员之一，已有研究证实，其在胃癌组织中高表达，且与转移有关[1-3]。微小

RNA(miRNA)是真核生物中一类21～25个核苷酸的非编码小分子RNA，在进化

上具有高度保守性，通过与靶基因mRNA3′端非编码区(3′untranslatedregion，

3′UTR)互补而抑制或促进靶基因mRNA降解或抑制其翻译，从而对基因进行转录

后的表达调控，作为一类潜在的癌基因或抑癌基因发挥作用[4-6]。探讨研究靶向

调控ALCAM的miRNA，可能为胃癌