1.2.2 微生物的选择培养和计数-高二生物（人教版2019选择性必修3）.pptx

;自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。;1.科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶;根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。;⑴利用营养缺陷进行选择培养

*营养缺陷的微生物不能正常生长

⑵利用添加某种化学物质进行选择培养

*添加杀伤性物质，有抗性的可以生长，无抗性的死亡

⑶利用改变培养条件进行选择培养

*调节温度、pH等生长条件，只有适应的可以生长;6;;加入青霉素：;尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。;?;微生物筛选过程中，除选择培养基外，另外还需设置两组对照培养基，以提高实验的说服力和科学性。;二、微生物的选择培养;⑵将10g土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。

取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。;1.将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。;待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃恒温箱中培养1～2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。;⑴各操作细节要保证“无菌”，所有操作都应在酒精灯火焰旁进行。

⑵将涂布器浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。

⑶操作中要注意防火。涂布结束后，应将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，以检测培养基是否灭菌彻底。

⑷10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，再计算时，不要忽略。

⑸由于使用的是选择培养基，所以一般情况下，获得的单菌落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证。;平板划线法和稀释涂布平板法的比较;当样品的稀释度足够高时，培养基上表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个???菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。;甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？;在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。;三、微生物的数量测定;内容;1、显微镜直接计数：;（比例计数法）;举例：已知红细胞浓度为M个/mL，从体积为NmL的大肠杆菌培养液中取出大肠杆菌液与红细胞液等量均匀混合后，涂片，染色，镜检。在同一视野中发出有红细胞W个，大肠杆菌Y个，求NmL大肠杆培养液中大肠杆菌的个数X是多少？;一、课题目的;;⑴每个浓度至少设置4个平板：

1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复）：对土壤中分解尿素的细菌分离和计数。

4为牛肉膏蛋白胨培养基：用以判断选择培养基是否具有选择作用;⑵不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。;⑴培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。

;5.结果分析;1.原理：细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。

2.方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红：

液体培养基可以直接看液体的变色情况；

固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带；

红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。;课堂小结

;(1)测定不同微生物数量时，接种的土壤稀释液的稀释度相同()

;3.(多选)下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验操作的叙述，正确的是

A.利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度

B.若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置未接种的牛肉膏

蛋白胨培养基作为对照

C.该实验应采用稀释涂布平板法

D.用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后会

使酚红指示剂变红;4.(2023·江苏连云港高二期末)在做“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验时，甲同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。下列有关叙述错误的是

A.甲同学出现这种结果的原因可能是土样不同，也可能是操作过程出了

问题

B.将