油棕组织培养技术规程.docxVIP

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DB46/T***—201*

油棕组织培养技术规程

1范围

本标准规定了油棕（ElaeisguineensisJacq.）组织培养育苗技术的术语和定义、组织培养操作、苗圃育苗、苗木档案等技术要求。

本标准适用于海南省范围内油棕无性系组培苗的繁育。

2规范性引用文件

下列文件对于本规程的应用必不可少。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适合本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T1000容器育苗技术

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

LY/T2280林木种苗生产经营档案

NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程

LY/T2428杉木组织培养育苗技术规程

DB46/T316油棕种苗繁育技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

侏儒株juvenileform

叶片发育生长迟缓，持续无羽裂叶片出现的植株（见附录A中图A1）。

3.2

直立株uprightform

叶片与茎干夹角小，不弯曲，呈直立状的植株（见附录A中图A2）。

3.3

宽节株wideinternodes

小叶节间距离显著宽于相同龄正常植株的植株（见附录A中图A3）。

3.4

羽叶leatherleaf

裂片多数，革质，呈线状披针形，深裂至中脉的羽状复叶。

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4组培工厂要求

参照NY/T2306规定进行。

5组织培养操作

5.1外植体

5.1.1母株选择

选择油棕优良品种中农艺性状优良、生长健壮、无病虫害的优异成龄单株或具有特异性状种质的成龄单株为母株，并逐株编号。

5.1.2外植体采集

一周内无雨时可采集外植体。取材前，将母株生长点附件一侧的叶片铲掉，用铲刀将生长点上方的油棕芯叶整块取下，剥除其外侧叶柄，用75%的酒精对芯叶块表面进行消毒处理，待芯叶块表面干燥之后装入干燥封闭的容器内，带回实验室备用。

5.1.3外植体无菌处理

用湿布擦洗芯叶块表面污垢，接着用75%的酒精擦洗其外部及两端切口，然后将心叶块置于超净工作台上，再用75%酒精擦洗2min后，剥去外层，依照此方法层层消毒，最后选留心叶块中较嫩的心叶块作为外植体。用刀将心叶块切分成5cm～6cm的小段并装入无菌组培瓶中备用。

5.2培养基

5.2.1培养基类别

培养基分为愈伤组织诱导培养基、体细胞胚诱导培养基、次生胚诱导与增殖培养基、芽诱导培养基、生根培养基，配方见附录B。

5.2.2培养基配制

培养基配制及其灭菌参照LY/T1882规定进行。

5.3接种

包括接种前准备和接种操作，具体要求参照LY/2428。

5.4培养过程

5.4.1愈伤组织诱导培养

外植体接种

将心叶块切成1cm×2cm的薄片，接种到装有愈伤组织诱导培养基的培养皿中，每皿接种5片。

愈伤组织诱导

接种后，每60d更换1次愈伤组织诱导培养基，出现愈伤组织后，继代培养1～2次，选瘤状淡黄色或米色愈伤组织转到体细胞胚诱导培养基进行体细胞胚诱导。

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培养条件

置于室温28±1℃,黑暗条件下培养。

5.4.2体细胞胚诱导培养

体细胞胚诱导接种

将质量较好的瘤状愈伤组织转接到装有体细胞胚诱导培养基中进行体胚诱导。

体细胞胚诱导

接种后，每60d继代培养1次，继代培养3次后，将诱导获得的胚转至次生胚团诱导培养基进行次生胚诱导。未长胚的愈伤组织废弃。

培养条件

接种后，置于28±1℃,光照强度3000lx，每天光照时间12h。

5.4.3次生胚团诱导与增殖培养

次生胚诱导与增殖接种

选未萌芽的初生胚接种到次生胚诱导与增殖培养基，在250ml培养瓶中接种5团。

继代周期

体细胞胚接种到次生胚诱导培养基培养60～90d后可形成次生胚团，次生胚团切成1cm团块转到新鲜培养基继续增殖培养，之后每30d继代一次。培养条件同。

次生胚团质量要求

次生胚团乳白色或浅绿色，鲜亮；无褐化和水浸状；增殖倍数在2左右；无污染。

继代培养代数

次生胚团继代应控制在24代以内。

5.4.4丛芽诱导培养

丛芽诱导接种

将次生胚团增殖中产生的类似芽组织团切离次生胚团，转到芽诱导培养基，在250ml培养瓶中接种5团。

丛芽诱导

每60d更换新鲜培养基1次，培养180d左右形成丛生芽，丛芽中多数单芽具2～3片叶。将超过2片叶片健壮