分子医学及分子医学技术.pptVIP

淡绿、橘黄、浅红、金黄……用这些天然彩色蚕茧丝无需染色而织成色彩斑斓的绸缎，兼具华美外观和环保内质。通过基因重组法选育高产彩色茧蚕品种获成功。玫瑰的栽培历史可以追溯到5000年前，但通过色素呈现出蓝色的玫瑰却从来没有过。从蓝色三叶草中提取制造蓝色色素的基因，然后注入到玫瑰中，并成功地让翠雀花素单独显色。目的基因基因载体重组体分切接转筛总体技术路线分:1切:2限制性内切酶3限制性酶活性缓冲液甲基化底物性状“分子手术刀”“分子剪刀”的发现者“分子针线”接:DNA连接酶转:基因载体宿主细胞克隆位点筛:基因表达05大肠杆菌SS蛋白重组体+SS基因E.coli表达体系优势：一种成熟的基因克隆表达的受体细胞繁殖迅速，培养代谢易于控制易于进行遗传操作和高效表达分子医学的社会、伦理问题子医学与传统医学最根本的区别在于前者可在基因水平上对疾病进行操作。对遗传物质的操作可能引发的后果一开始就是科学界和公众关注的问题。早在70年代初，基因重组技术刚开始出现的时候，以美国著名分子生物学家伯格（Berg）为首的11名科学家共同呼吁禁止开展基因工程的研究，并得到了美国国立卫生研究院的赞同。?01科学家们对自己的研究工作可能产生的严重后果公开唤起公众的注意，这在科学史上还是第一次，说明科学家对遗传物质的操作所取的态度是极其谨慎的。02在那以后，利用基因工程技术在大肠杆茵中生产预定的蛋白质分子被证明是无害可行的，因而在80年代以来得到了迅速的发展，但将基因操作直接应用于人类疾病的治疗则与一般的基因工程不可同日而语。分子医学常用技术01基因获取基因检测基因重组基因表达基因标记基因探测基因转移基因信息基因获取02获取目标基因常常是基因操作的首要步骤。常规方法有PCR法，基因文库或cDNA文库法以及化学合成法。应根据具体的研究目的和实验条件选用合适的方法。AEDBC用途：PCR引物测序引物核酸杂交探针定点突变较短的基因（60-80bp）化学合成法限制性内切酶……基因组DNA基因文库克隆、转化、培养、鉴定基因文库引物引物3’5’5’5’基因组PCR技术01序列应位于高度保守区，与非扩增区无同源序列。02引物长度以15-40bp为宜。03碱基尽可能随机分布。04引物内部避免形成二级结构。05两引物间避免有互补序列。06引物3’端为关键碱基；5’端无严格限制引物设计：TaqDNA聚合酶PCR技术的基本过程模板DNAdNTP引物Buffer预变性模板DNAdNTP引物Buffer循环仪94oC5’94℃55℃72℃加样孔电泳图谱PCRPT-PCRDNAMarker基因检测03对一个基因或一段DNA片段进行检测鉴定是分子医学技术中最常用到的手段。包括电泳检测、序列分析、分光光度分析等方法。DNA分子的电泳检测电泳条带加样孔凝胶浓度与DNA片段大小电压、电流与分辨率凝胶板的制备电泳缓冲液、上样缓冲液电泳的时间与环境温度法国VL凝胶成像系统核酸定量和纯度分析共轭双键：对260nm波长紫外光有较强吸收。消光系数波长220240260280300BECKMANDU800核酸蛋白检测仪DNA序列检测基因重组与基因工程04基因重组技术作为分子医学中最重要、最基本的技术之一，是许多分子医学实验实施的基础，在基因诊断、治疗和预防中具有举足轻重的意义。现代基因工程的创始人P·伯格（美国,1926－）在1960年以敏锐的科学预见力提出一个大胆的设想：是否可以创造出一种人工方法，把外界的遗传基因引入动物体内，以达到改变遗传性状和治疗某些疾病的需要呢？1972年，伯格把两种病毒的DNA用同一种限制性内切酶切割后，再用DNA连接酶把这两种DNA分子连接起来，于是产生了一种新的重组DNA分子，首次实现两种不同生物的DNA体外连接，获得了第一批重组DNA分子，这标志着基因工程技术的诞生。伯格因此获得了1980年诺贝尔化学奖。1973年，美国斯坦福大学教授S·科恩和加州大学旧金山分校教授H·W·博耶将两个不同的质粒（一个是抗四环素质粒，另一个是抗链霉素质粒）拼接在一起，组成嵌合质粒，并将其导入大肠杆菌，当该重组质粒进入大肠杆菌体内后，这些大肠杆菌能抵抗两种药物，而且这种大肠杆菌的后代都具有双重抗药性。这表明“杂合质粒”在大肠杆菌的细胞分裂时也能自我