实验动物技术课件.ppt

第十二章转基因动物培育技术;第一节实验动物胚胎工程的基本内容;五、胚胎分割(Embryosplit)

六、体外受精(InVitrofertilization)

七、显微受精(Microfenilization)又称辅助受精(Assistedfertilization)

八、细胞核移植(Nucleartransplantation)

九、卵的激活与孤雌发育(Ocyteactivationandparthenogeneticdevelopment)

十、胚胎干细胞(Embryonicstemcell)简称ES细胞

;第二节实验动物冷冻胚胎库的建立;2．试剂药品3．溶液配制

4．操作程序

(1)超数排卵(2)采集胚胎(3)挑选胚胎

(4)胚胎冻存(5)资料

(6)入库的各品种品系胚胎，必须分2份以上，放存在不同罐内和不同地方

(7)当需要使用胚胎和检测胚胎时，取出机动胚胎管，按冻存方法条件，采用相应的解冻方法解冻、复苏

(8)每个品种品系冻存胚胎数量;第三节试管动物的培育;4．受精卵培养

5．胚胎移植

二、试管兔的培育

(一)几种溶液的配制

1．培养液成份2．PBS液

3．TCM—199液配制

4．DM(DefinedMedium)

(二)精液采集和获能

1．采集精液2．精子获能

(三)供体母兔超排;(四)受体母兔同步发情

(五)供体母兔注射HCG(六)体外受精

(七)受精卵培养(八)胚胎移植

三、试管猕猴的培育

(一)溶液配制

(二)超排(三)采卵

(四)采精与精子获能

1．电刺激采精器

2．用直肠探子法的采精技术;第十二章转基因动物培育技术;一.概况;;定义

采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。;;激素转基因鼠(硕鼠)，右边为同胞鼠对照。;核转移技术

即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone)。;基因剔除技术

也称基因靶向(genetargeting)灭活，有目的去除动物体内某种基因的技术。;转基因动物（transgenicanimals）是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。

整合到动物染色体基因组的外源基因被称为转基因(transgene)。

转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术，它涉及外源基因的组建、载体、受体、基因导入技术、供转基因胚胎发育的体外培养系统和宿主动物等许多方面。;二、克隆动物;2.研究现状;在农业方面，转基因农业动物研究有了很大进展，尤其在通过胚胎细胞或体细胞将基因导人牛、猪、羊和山羊，产生可遗传的转基因牲畜方面发展很快。说明转基因牲畜不仅可作为生物反应器，为人类生产基因工程产品和用于牲畜品种改良，提供更好的服务，同时也促进了胚胎学和发育遗传学的飞速发展，并开拓了医学研究的新领

;人类培育出的第一只转基因猴“安迪”。于2000年10月2日在美国出生。;2003年11月21日，美国得克萨斯的一家公司宣布，经过转基因技术他们已经研制出能发荧光的小型热带鱼———“荧光鱼;2004年6月30日由中国军事医学科学院主持，山东农业大学、莱阳农学院等单位共同参与首批28只带有t-PA组织型纤溶酶原激活剂的转基因羊，在山东省东营市天翼公司陆续降生。t-PA是目前治疗急性心肌梗塞最好的溶血栓药物，;二、转基因动物培育的原理和方法;2.关键技术:

（1）外源目的基因的制备

（2）外源目的基因的有效导入

（3）胚胎培养与移植

（4）外源目的基因表达的检测;

;是指利用重组DNA技术将目的基因

和载体重组，再导入受体细胞内进行扩

增和表达的过程。;是指通过无性繁殖过程所产生的

与亲代完全相同的子代群体。基因工

程相当于目的基因的无性繁殖过程，

也称其为基因克隆(genecloning)。;;（1）工具酶;限制性内切酶;作用：与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统，

限制外源DNA，