2025届高考生物一轮复习新考案-大单元11生物技术与工程第59讲dna相关的两个重要实验(人教版2019).docxVIP

第59讲DNA相关的两个重要实验

【课标内容】1．实验：DNA的提取与鉴定；2．实验：利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定或运用软件进行虚拟PCR实验。

实验17DNA的粗提取与鉴定

实验回归

1．实验思路、原理

(1)提取的基本思路：DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，利用这些差异，对DNA进行提取。

(2)相关原理

2．材料选择

(1)依据：选用__DNA含量高__的组织，成功的可能性更大。

(2)常用材料：新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花、鸡血和猪肝等(方法可能稍有不同)。

3．实验过程

解疑释惑

(1)研磨液的成分和作用

研磨液成分

作用

SDS

使蛋白质变性

EDTA

抑制DNA酶

Tris－HCl缓冲液

稳定DNA

(2)研磨的目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中。

(3)低温放置几分钟(或酒精预冷)的作用：①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；②抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；③低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。

(4)搅拌时应轻缓、并沿一个方向的目的：减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子。

实验延伸

用鸡血细胞作为实验材料的操作流程(苏教版)

步骤

材料/方法

说明

制备鸡血

细胞液

新鲜鸡血

哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核(或不含有DNA)，故不能选用

提取

血细胞

核物质

加入一定量的蒸馏水，破碎细胞，并用玻璃棒搅拌，过滤，获取含有DNA的滤液

细胞吸水涨破，玻璃棒搅拌加速细胞破裂

析出

DNA

①取滤液加入物质的量浓度为2mol·L－1的NaCl溶液；

②缓缓加入一定量的蒸馏水，调节物质的量浓度至0.14mol·L－1，析出DNA，丝状物不再增加时停止加蒸馏水；

③用玻璃棒挑起丝状物，获得含一定杂质的DNA

DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同

向滤液中加入等体积的、冷却的体积分数为95%的酒精，静置2～3min，并用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物DNA

酒精能够减少DNA的降解，同时也能够溶解杂质

实验素养

一、实验基本理论——实验变量与原则

取两支20mL的试管，各加入2mol·L－1的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。

1．上述实验中，自变量是__丝状物或沉淀物的有无__，因变量是__溶液颜色__，无关变量是__2mol·L－1的NaCl溶液、二苯胺试剂和沸水及加热5min__等。

2．实验遵循的原则：两支20mL的试管说明实验需要__分组__，2mol·L－1的NaCl溶液5mL、4mL的二苯胺试剂和沸水中加热5min中的数字则说明实验要遵循__等量__原则，“将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中”则说明实验需遵循__单一变量__原则。

二、试剂的选择和使用

DNA提取过程中可以选用鸡血或者菜花作为实验材料。请回答下列关于DNA粗提取和鉴定的问题：

1．使用鸡血提取DNA时，需在鸡血中加入柠檬酸钠，目的是__防止血液凝固__；在鸡血细胞溶液中加入蒸馏水，目的是__使鸡血细胞破裂__。

2．使用洋葱提取DNA时，需要加入研磨液，研磨液能够__防止DNA被水解__，另外有利于蛋白质与DNA发生分离。

3．DNA在物质的量浓度为__0.14__mol·L－1的NaCl溶液中溶解度最低。使用体积分数为95%的冷却酒精可使DNA__析出__(选填“析出”或“溶解”)。

4．此实验中二苯胺试剂的作用是__鉴定DNA__，需要现配现用。

题组训练

1．(2019·江苏卷)下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是(A)

A．用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近

B．DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂

C．预冷的乙醇可用来进一步纯化粗提的DNA

D．用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热

解析：兔属于哺乳动物，其成熟的红细胞没有细胞核及各种细胞器，提取不到DNA，而鸡属于鸟类，其红细胞内含有细胞核与各种细胞器，DNA含量较多，A错误；DNA分子是非常容易断裂的，轻柔搅拌的目的是获得较完整的DNA分子，B正确；DNA不溶于酒精，蛋白质可以溶于酒精，所以冷却的体积分数为95%的酒精溶液可以进一步纯化粗提的DNA，C正确；将析出的DNA溶解在2mol·L－1的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂后需要沸水浴加热才会呈现蓝色，D正确。

2．(2022·山东卷)关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法错误的是(B)

A．过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了减