毒理学实验基础 .ppt

第Ⅱ种情况是具有生物学意义但无统计学意义，这可能是因为该事件的发生是极端罕见的，例如在哺乳动物致癌试验中，在染毒组中出现对照组中没有的肿瘤类型，尽管从统计学上此种肿瘤的发生率很低，与对照组比较差别无显著性(P0.05)，但还应该认为是有生物学意义的。第95页,共98页，星期六，2024年，5月第六节食品毒理学试验方法和安全性毒理学评价展望近十多年来，欧美在公众动物保护潮流冲击下和经济因素影响，毒理学界，提出了减少或部分取代使用实验动物的“替代试验方法”（alternativetestingmethods）。“替代方法”是使用微生物、细胞、组织、基因动物（也包括虚拟数据库）等来预测外来化学物对人的毒性。问题是“替代方法”如何外推到人。第96页,共98页，星期六，2024年，5月随着全球经济一体化的趋势，要求有一套国际认可或统一的毒理学试验规范以利国际贸易进行。目前，欧洲和北美分别有政府组织在进行这方面的工作，如欧盟的“替代方法欧洲确认中心”（ECVAM）和美国的“替代方法指标确认国际协作委员会”（ICCVAM）。他们致力于国内和国际间的协调工作。这项改革涉及规范的科学性和政策性，即合理性和合法性。这是食品毒理学21世纪初的一件重要工作。共同认可的方法应是可靠的、成熟的、有机制依据的以及可以重复的。根本的问题是毒理实验室出具的毒理学试验报告在国际上被认可和接受。第97页,共98页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第98页,共98页，星期六，2024年，5月一、动物实验前的准备实验动物在购进之后，应雌雄分开饲养。一般应进行5～7天的检疫，在此期间应多次观察动物，及时剔除不健康的动物。观察期结束，将实验动物按实验设计的要求进行标记和分组。第63页,共98页，星期六，2024年，5月实验动物的标记方法对啮齿动物常用染色法，可用苦味酸(黄色)、品红(红色)的酒精饱和溶液在动物被毛上染色，不同的颜色和染色部位表示不同的编号，可标出1～99号。由于被毛上颜色会逐步消失，故需重复染色。对啮齿动物还可用剪耳法标记。对狗等大动物一般用挂牌法。利用耳号钳在动物的耳朵上打号，每剪一个耳缺代表一个数字，两个耳朵的耳缺相加所得数字为该动物编号。耳号钳第64页,共98页，星期六，2024年，5月实验动物分组的原则要求所有的动物分配到各剂量组和对照组的机会均等，避免主观选择倾向，减少偏性，以保证结果的准确可靠。正确的分组方法是随机分组。实验动物按性别、体重顺序编号，然后利用统计学的随机数字表，按完全随机分组法或配伍组随机分组法，将实验动物分配到各剂量组和对照组。然后应计算各组实验动物体重的均值和标准差，必要时可将实验动物适当调组，以使各组实验动物体重的均值的差别不超过允许范围。第65页,共98页，星期六，2024年，5月二、受试物和样品的准备应了解受试物的纯度及杂质成分，了解受试物的化学结构和理化性质，特别是其挥发性和溶解性。查阅文献，检索与受试物化学结构和理化性质相似的化合物的毒性资料，以作参考。对各个毒理学试验应该用同一种、同一批号受试物。受试物成分和配方必须固定。如是异构体混合物，异构体比例必须固定。活性成分的百分含量和可检测的杂质的浓度也应固定。受试物在贮存期内稳定性和在饲料中的稳定性必须进行研究并报告。受试物应一次备齐全部实验的用量。第66页,共98页，星期六，2024年，5月所需受试物总量＝(A×B×C×D)×1.2式中：A为每组动物数；B为各处理组的剂量和(如0.1+0.3+1.0mg/kg＝1.4mg/kg)；C为染毒次数(通常为天)；D为动物的平均体重；1.2为安全因子，防止损耗。第67页,共98页，星期六，2024年，5月染毒前根据染毒途径的不同，应将受试物制备成一定的剂型。常用的是制备成水溶液、油溶液或混悬液。对溶剂和助溶剂的要求是，所用的溶剂或助溶剂应该是无毒的，与受试物不起反应，受试物在溶液中应稳定。对水溶性受试物，体内试验适当的溶剂为水(经口染毒)和等渗盐水(胃肠道外染毒)。水不溶性受试物应溶于或悬浮于适当的有机溶剂中。外源化学物用溶剂稀释，一般讲浓溶液比稀溶液毒性大，但是也有的外源化学物稀释之后毒性反而增加，即存在所谓“稀释毒性”，其原因尚不清楚。第68页,共98页，星期六，2024年，5月在准备染毒制剂时的要点：①在准备制剂时加热受试物不应接近改变其化学性质或物理性质的温度。②如受试物为固体，并且评价其对皮肤的毒性，应保持其形状和颗粒大小。③多成分的受试物(混合物)应按配方配制，以使染毒制剂准确地反映原混合物(即其成分不应被选择性地悬