大肠杆菌的乳糖操纵子.ppt

大肠杆菌的乳糖操纵子什么是操纵子模型操纵子模型认为：一些功能相关的结构基因成簇存在，构成所谓的多顺反子（polycistron)，它们的表达作为一个整体受到控制元件（controlelement)的调节。控制元件由启动子、操纵基因（operator）和调节基因组成。调节基因编码调节蛋白，与操纵基因结合而调节结构基因的表达。如果调节基因编码的蛋白质与操纵基因的结合是阻遏基因的表达，这样的调控就称为负调控（negativecontrol），相应的调节蛋白被称为阻遏蛋白（repressor);如果调节基因编码的蛋白质与操纵子基因的结合是激活基因的表达，这样的调控被称为正调控（positivecontrol），相应的调节蛋白被称为激活蛋白（activator）。大肠杆菌的乳糖操纵子是第一个被阐明的操纵子。早在20世纪50年代，Jacob和Monod就开始研究大肠杆菌的乳糖代谢，集中研究乳糖对乳糖代谢酶的诱导（introduction）现象：如果供大肠杆菌生在的培养基中没有乳糖，那么细胞内参与乳糖分解代谢的三种酶，即β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）、乳糖透过酶（lactosepermease）和巯基半乳糖苷转乙酰酶很少，如每个细胞的β-半乳糖苷酶的平均含量只有0.5~5个。可是一旦在培养基中加入乳糖或某些乳糖的类似物，则在几分钟内，每个细胞中的β-半乳糖苷酶分子数量骤增，可高达5000个，有时甚至可占细菌可溶性蛋白的5%~10%。与此同时，其他两种酶的分子数也迅速提高。由此可见，新合成的β-半乳糖苷酶、透过酶和乙酰化酶由底物乳糖或其类似物直接诱导产生，乳糖及其相关类似物被称为诱导物。Fran?oisJacobJacquesMonod如图：加入乳糖以后，1min内出现lacmRNA，稍后即产生β-半乳糖苷酶和透过酶。当移去乳糖之后，lacmRNA总量立即下降，两种酶的活性却由于蛋白质半衰期较长而在相当长的时间内维持稳定乳糖操纵子的负调控β-半乳糖苷酶主要催化乳糖分子内β-糖苷键的水解，生成半乳糖和葡萄糖，还催化少量乳糖变成别乳糖的异构化反应，它由lacZ基因编码；透过酶是一种跨膜运输蛋白，负责将培养基中的乳糖运输到胞内，由lacY基因编码；乙酰化酶可催化乙酰基从乙酰辅酶A转移到β-半乳糖苷上，由lacA基因编码，但其功能尚不知晓，因为缺乏乙酰化酶的突变体仍然可以利用乳糖。还有一种变体对诱导物没有反应。遗传作图表明上述变体的突变位点靠近lacZ、lacY和lacA，被命名为lacI。0102为了确定这几种基因的关系，Jacob和Monod使用含有lacI、lacZ、lacY和lacA的F’-质粒创建了部分二倍体的大肠杆菌，并进行了一系列互补实验，其中下图的两种突变对于操纵子模型的最终建立起了决定性的作用。乳糖操纵子的调控模型二、乳糖操纵子的负调控乳糖操纵子的调控模型主要内容：乳糖操纵子由调节基因、启动子、操纵基因和三个结构基因组成，其中调节基因、启动子、和操纵基因构成控制元件，共同控制结构基因的表达。操纵基因位于启动子和结构基因之间，其核心结构是一段长位21bp的回文序列。015’ATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAA3’023’TACAACACACCTTAACACTCGCCTATTGTTAAAGTGTGTCCTT5’03二、乳糖操纵子的负调控调节基因lacI编码阻遏蛋白，它独立表达，但由于是弱的启动子和终止子，阻遏蛋白在细胞内总是被维持在较低的浓度；阻遏蛋白位四聚体蛋白，由四个相同的亚基组成。在无乳糖的情况下，它与操纵基因lacO结合而阻断RNA聚合酶启动结构基因的转录，但这种结合并不完全，因此会有微量的β-半乳糖苷酶、乳糖透过酶和巯基半乳糖苷转乙酰酶的合成。二、乳糖操纵子的负调控01020304一旦高浓度的乳糖进入细胞，在细胞内残留的β-半乳糖苷酶催化下，一部分乳糖被异构化，变成别乳糖。而别乳糖作为别构效应物与阻遏蛋白结合，改变阻遏蛋白的构象，使其不能再与操纵基因结合，于是操纵子被打开；由于阻遏蛋白与操纵基因的结合阻断结构基因的表达，因此，乳糖操纵子受到它的负调控；RNA聚合酶与启动子结合，启动三个结构基因的转录，产生lacZ、lacY和lacA的共转录物，但翻译却是独立地进行，从而产生三种不同的酶；发生在控制元件内的突变可影响到结构基因的表达。他们都是高效诱导物，他们都不是半乳糖苷酶的底物，是一种人工合成的乳糖类似物，能够迅速和持续地刺激乳糖操纵子结构基因的表达，它本身不能被降解，所以称他们为安慰性诱导（gratuitousinducer）.三、乳糖操纵子的正调控乳糖操