生物化学核酸课件课件.ppt

二、RNA的种类和分子结构

RNA的一级结构：多核糖核苷酸链中核苷酸的排列顺序RNA为一条多核苷酸链，有的碱基配对，有的不配对，可以螺旋，也可以不螺旋。RNA通常以单链形式存在，局部可有二、三级结构第55页,共77页，星期六，2024年，5月动物细胞内主要RNA的种类及功能核蛋白体RNA信使RNA转运RNA功能核蛋白体组分蛋白质合成模板转运氨基酸核蛋白体RNA信使RNA转运RNA细胞核和胞液功能rRNAmRNAtRNA核蛋白体组分二、RNA的种类和分子结构核蛋白体RNA第56页,共77页，星期六，2024年，5月（一）信使RNAhnRNA内含子(intron)mRNA*mRNA成熟过程外显子(exon)mRNA的功能：作为蛋白质合成的模板。第57页,共77页，星期六，2024年，5月*mRNA结构特点1.大多数真核mRNA的5′末端形成帽子结构：m7GpppNm-。2.大多数真核mRNA的3′末端有多聚A尾。第58页,共77页，星期六，2024年，5月*tRNA的一级结构特点含稀有碱基较多3′末端为—CCA-OH5′末端大多数为G由70~90个核苷酸组成（二）转运RNA*tRNA的功能选择性搬运氨基酸到核糖体，参与蛋白质的翻译。第59页,共77页，星期六，2024年，5月*tRNA的二级结构——三叶草形氨基酸臂额外环第60页,共77页，星期六，2024年，5月*tRNA的三级结构——倒L形第61页,共77页，星期六，2024年，5月*rRNA的结构（三）核蛋白体RNA*rRNA的功能参与组成核蛋白体（rRNA+pr），作为蛋白质生物合成的场所。核蛋白体包括大亚基和小亚基第62页,共77页，星期六，2024年，5月核酸的理化性质第三节第63页,共77页，星期六，2024年，5月一、一般的理化性质两性解离/一般呈酸性（在中性溶液中带负电荷），微溶于水，不溶于有机溶剂线性大分子（粘度高。抗剪切力差）可用电泳或离子交换（色谱）进行分离室温条件下，DNA在碱中变性，但不水解，RNA水解加热条件下，D－核糖＋浓盐酸＋苔黑酚绿色D－2－脱氧核糖＋酸＋二苯胺蓝紫色第64页,共77页，星期六，2024年，5月一、紫外吸收在260nm波长有最大吸收峰，是由碱基的共轭双键决定的。这一特性常用作核酸的定性、定量分析。第65页,共77页，星期六，2024年，5月二、核酸的紫外吸收特性在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸收光谱，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组份定性和定量测定的依据。以A260/A280进行定性、定量DNA和RNA溶液中加入溴化乙锭（EB），在紫外下发出荧光第66页,共77页，星期六，2024年，5月三、核酸的变性、复性与分子杂交1.变性稳定核酸双螺旋次级键断裂，空间结构破坏，变成单链结构的过程。核酸的的一级结构(碱基顺序)保持不变。变性表征生物活性部分丧失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加（增色效应）变性因素：pH（11.3或5.0）变性剂（脲、甲酰胺、甲醛）低离子强度加热第67页,共77页，星期六，2024年，5月二、DNA的变性定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。变性因素：过量酸，碱，加热等。第68页,共77页，星期六，2024年，5月DNA变性的本质是双链间氢键的断裂第69页,共77页，星期六，2024年，5月DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将紫外吸收的增加量达最大量一半时的温度称熔解温度，用Tm表示。一般DNA的Tm值在70-85?C之间。DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关。G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G,C含量，可通过经验公式计算：（G+C)%=(Tm-69.3)X2.442.热变性和Tm第70页,共77页，星期六，2024年，5月例：变性引起紫外吸收值的改变DNA的紫外吸收光谱增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。第71页,共77页，星期六，2024年，5月Tm：DNA解链50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(Tm)。其大小与G+C含量成正比。第72页,共77页，星期六，2024年，5月三、DN