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ICS11.220

B41

DB21

宁省地方标准

DB21/T22522014

Ｏ型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法

MethodofRT-PCRforthedetectionoftypeOfootandmouthdiseasevirus

2014-03-07发布2014-05-07实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T22522014

Ｏ型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了Ｏ型口蹄疫病毒（FMDV-O）RT-PCR检测方法的实验材料、仪器设备、试剂、操作步

骤和结果判定，并介绍了其原理。

本标准适用于动物及动物产品中Ｏ型口蹄疫病毒的检测。

2规范性引用文件m

下列文件对于文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版适用于本文

o

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于文件。

GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法c

中华人民共和国农业部告第302号兽医实验室生物安全技术管理规范

.

3缩略语w

下列缩略语适用于标准。x

DEPC焦炭酸二乙酯

f

RNA核糖核酸

RT-PCR反转录聚合酶链反应

z

dNTP脱氧核苷酸三磷酸

bp碱基对

b

Ｏ-P液.牛、羊食道-咽部分泌物

4原理w

FMDV是一种RNA病毒。RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。根据FMDV-O保守基

w

因序列设计一对引物，在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以引物为延伸起点，通过变性、

退火和延伸，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。

w

5实验材料、仪器设备和试剂

5.1实验材料

眼科剪、眼科镊、称量纸、1.5mL灭菌离心管（DEPC水处理）、0.2mL薄壁PCR管、琼脂糖、500mL

量筒、500mL三角瓶、吸头（10µL、200µL、1000µL）。

5.2仪器设备

1

DB21/T22522014

分析天平、低温高速离心机、PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、

－70℃冰箱、微波炉、组织研磨器、－20℃冰箱、