DB43T 2332-2022 茶白星病原菌检测技术规程.docxVIP

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DB43

湖南省地方标准

DB43/T2332—2022

茶白星病原菌检测技术规程

TechnicalregulationfordetectionofElsinoeleucospila

2022-05-06发布2022-08-06实施

湖南省市场监督管理局发布

DB43/T2332—2022

I

目次

前言 Ⅲ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4样品采集 1

5形态检测 2

6分子检测 2

附录A（资料性）茶白星病的田间症状 4

附录B（资料性）茶白星病菌的菌落、菌丝与孢子形态 5

附录C（资料性）茶白星病菌基因序列片段 6

参考文献 7

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III

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。

本文件由湖南省农业农村标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省茶叶研究所。

本文件主要起草人：周凌云、杨辉、杨文波、向芬、刘红艳、李维、银霞、曾泽萱。

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1

茶白星病原菌检测技术规程

1范围

本文件规定了茶白星病原菌的术语和定义、样品采集、形态检测和分子检测。本文件适用于茶白星病菌-茶痂囊腔菌（Elsinoeleucospila）的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T8302茶取样

SB/T10314—1999采样方法及检验规则NY/T3862茶云纹叶枯病监测技术规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4样品采集

4.1采样特征

4.1.1发生部位

茶白星病症状可见于0～2000m海拔茶区的茶树嫩梢、成叶、老叶与花苞等茶树组织。

4.1.2初期症状

初期病斑为针尖大小的红褐色小点，随即围绕该点出现多个红褐色斑点呈卫星状分布，斑点直径生长至2.5mm大小，红褐色圆形病斑边缘具有暗褐色至紫褐色隆起线，中间凹陷、平伏或凸起。

4.1.3后期症状

发病后期病斑由红褐色渐变为黑褐色，边缘凸起，中间白色，呈疮痂状，病斑呈数个至上百个连片分布，严重时病斑相互融合成不规则的大病斑。大病斑常呈黑色凸起，中间呈灰白色（见附录A）。

4.2采样

采样量不得少于检验需要量的三倍。随机选取具有典型症状的茶枝，保湿剪切口后样品分装、贴标签（包括来源、地点、采集人、日期等信息）。

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2

5形态检测

5.1材料与仪器

培养皿、枪头、三角瓶、玻璃棒、剪刀、解剖刀、镊子、接种环、75％酒精、3％次氯酸钠、移液枪、酒精灯、超净工作台、培养箱、灭菌锅、天平。

5.2病原分离

选取有发病组织的样品，用无菌水洗净，从叶脉、茎秆或叶肉等组织的病健交界处切取约2mm×2mm小块病组织，于75％乙醇中5s、3％次氯酸钠溶液中110s、无菌水中清洗3次、晾干后置于直径9cm的PDA培养基（200g马铃薯、20g葡萄糖、20g琼脂粉，蒸馏水定容至1L）平板上，再倒置于恒温培养箱中24℃下黑暗培养7d，待菌落长出形成孢子后，用琼脂平板单孢子挑取法进行单孢分离。

5.3病原菌落

茶白星病的病原为痂囊腔属（Elsinoe）的E.leucospila，属于子囊菌。单孢分离的菌株，以PDA平板培养基在24℃恒温培养箱中培养至稳定期并观察，该菌生长速度很慢，60d至80d后菌落生长至稳定期。菌落初期为黄褐色，后期为红褐色，呈近圆形毡状，边缘有褶皱，边界光滑清晰，质地致密坚硬，中心位置丘状凸起，具粉红色粘稠状分生孢子堆，后期菌落边缘较薄，表面有时产生白色菌丝，并分泌色素等物质使培养基呈黄色或红色等颜色（见附录B-1）。

5.4分生孢子

分生孢子在光学或电子显微镜下的形态。成熟菌落的表面有大量分生孢子。光学或电