分子肿瘤概论研究生学生.pptVIP

01缺点05假阳性的概率比较高03灵敏度不及蛋白亲和色谱高02免疫沉淀蛋白有可能不是直接相互作用的蛋白，而是通过第三者间接相互作用的蛋白04必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性设置的对照包括：在对照组中使用对照抗体，以缺失目的蛋白的细胞系作为阴性对照等等。3.GST沉淀实验（GST-pulldown实验）主要是用来证明细胞外蛋白质相互作用利用GST(Glutathione-S-transferase，GST)和谷胱甘肽亲和树脂之间的高亲和性将GST固化在树脂上GST和谷胱甘肽转移酶蛋白在细菌、动物细胞等体系中融合表达固化的诱饵蛋白【即诱饵蛋白(Baitprotein)】可以捕获细胞裂解物中的互作用靶蛋白洗脱结合物后通过westernblot检测诱饵蛋白和靶蛋白,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白肿瘤细胞分离脱落，与细胞外基质黏附瘤细胞表面负电荷增加瘤细胞黏附力的改变瘤细胞自身结构异常瘤细胞同质黏附力下降指同种瘤细胞之间的黏附力瘤细胞异质黏附力增加01同质黏附力降低，有利于肿瘤细胞分离；03均由黏附分子介导05指肿瘤细胞与其它不同细胞及间质的黏附力02异质黏附力的增加，有利于瘤细胞与基底膜、间质成分粘附并穿过这些组织04通过配-受体之间的识别和结合实现06肿瘤黏附分子(adhesionmolecules)细胞表面结构钙黏蛋白(cadherin)又称为钙连接素，钙黏素。依赖细胞外钙介导钙离子依赖性细胞与细胞（同源细胞）的黏附据分布不同E-钙黏蛋白P-钙黏蛋白N-钙黏蛋白H-cad01整合素(integrin)02--细胞表面糖蛋白，约有20多个亚型03--各种肿瘤细胞表面整合素种类不同04--肿瘤生长各个阶段表达水平也不同05作用06介导细胞与细胞外基质的黏附07参与不同细胞之间的黏附连接08扮演细胞信号传递的角色09配体-整合素-细胞骨架蛋白跨膜信息传导系统免疫球蛋白超基因家族(immunoglobulinsuperfamily)01主要参与细胞与细胞间的连接02ICAM-1（细胞间黏附分子-1）03VCAM-1（血管黏附因子）04NCAM（神经细胞黏附因子）05其它包括CEA、DCC06选择素(selectin)内源性植物凝血素（凝集素）作用介导内皮细胞、血小板与瘤细胞黏附选择素家族包括：P-selectinE-selectinL-selectinCD44及其它CD44(透明质酸受体)--介导细胞与细胞外基质粘附路易斯寡糖（SLEX，,s-LewisX）--血管内皮细胞E-选择素的配体瘤细胞的迁移(migration)及化学趋向性瘤细胞的运动黏附；肌动蛋白、微管、中间丝瘤细胞运动的调节既影响运动又影响生长的因子仅影响运动的因子迁移刺激因子（MSF）AMF(自分泌运动因子)HGF/SF（肝细胞生长因子/分散因子)据其作用，大致可分为两大类：瘤细胞的化学趋向性0121KD的蛋白质02骨吸收因子03细胞外基质的降解肿瘤浸润细胞外基质的步骤Liotta1986年提出第一步黏附于基底膜或其他间质成分第二步分泌蛋白酶并激活,降解瘤细胞邻近的细胞外基质第三步进入受蛋白酶降解的基质区域内1肿瘤细胞产生的蛋白水解酶2丝氨酸蛋白酶类及其抑制因子3纤维蛋白溶解酶(纤溶酶)4纤溶酶原6激活胶原酶胶原降解5降解基质如纤维蛋白，FN,LM,蛋白多糖010203040506尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-typeplasminogenactivator,u-PA）系统u-PA：介导细胞周围基质蛋白的降解u-PA受体（u-PAR）及纤溶酶原受体活化u-PA原酶形式的u-PA纤溶酶原+纤溶酶原受体纤溶酶C．PAI（PA抑制剂）01PAI1是u-PA的主要抑制剂02PAI2不同肿瘤表达意义不一03PAI3功能不清04基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMP）及其抑制因子需钙、锌离子作辅助因子MMP分类胶原酶：如间质胶原酶（Collagenase）明胶酶：如明胶酶A