流式细胞仪的应用.ppt

P53控制着在DNA损失无法修复时启动的“自杀”进程。P53的缺失或突变已被证明是多种肿瘤发生的重要原因。它表达的高低是肿瘤诊断及预后的重要指标。Bcl-2是细胞凋亡的抑制蛋白，其与肿瘤的发生、发展和治疗等有着密切的关系。表达上调是肿瘤诊断的指标和预后的参考。nm23与多种肿瘤的转移及预后相关。第86页,共99页，星期六，2024年，5月造血干祖细胞检测CD34+造血干/祖细胞的检测。主要用于干细胞移植及基因治疗方面的检测。第87页,共99页，星期六，2024年，5月上图中红色群体是经过多参数设门后精确设定的CD34阳性细胞群体，绿色部分是进行定量计数的标准微球。第88页,共99页，星期六，2024年，5月血小板的测定第89页,共99页，星期六，2024年，5月白血病和淋巴瘤免疫分型

正常白细胞在其分化过程中，随着系列的不同、成熟阶段的差异，会在细胞膜表面表达不同的分化抗原。白血病细胞则在癌变的过程中，丧失了正常细胞的系列专一性和分化阶段规律性，在本质上有别于正常骨髓细胞。应用此特点可进行免疫表型分析，以鉴别各种白血病和淋巴瘤，辅助临床诊断、评估疗效和预后。常用的抗原包括：CD3、CD5、CD7、CD19、CD20、CD22、CD10、HLA-DR、CD13、CD14、CD33、CD34、GLY-A、MPO等等。第90页,共99页，星期六，2024年，5月左图为正常骨髓，绿色为正常淋巴细胞，深红为单核细胞，玫瑰红为成熟粒细胞，浅蓝为有核红细胞，深蓝为未成熟细胞；右图为急性髓性白血病图形，可见与正常明显的差别。第91页,共99页，星期六，2024年，5月HLA-B27的分析第92页,共99页，星期六，2024年，5月正常人患者HLA-B27第93页,共99页，星期六，2024年，5月发病机制：为X染色体上的PIG-A基因发生突变，引起糖化肌醇脂（GPI）锚连蛋白合成障碍，使GPI锚连蛋白缺乏。诊断：主要为CD55和CD59两种，如果在红细胞或WBC上出现CD55或/和CD59的减少，可诊断为PNH。阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）第94页,共99页，星期六，2024年，5月网织红细胞测定计数外周血中网织红细胞数量,对于评价骨髓红系造血及网织红细胞从骨髓到外周血的转送速率有重要意义。有核红细胞在成熟过程中,脱去细胞核后仍有少量RNA残留在细胞浆内,再经过约一天时间残留RNA完全消失,成为成熟红细胞。这种细胞浆内有残留RNA的红细胞称作网织红细胞。正常情况下有一定量的网织红细胞出现在外周血中,正常值为1.0～1.5%,上限3.0%,但当红细胞数异常时会出现错误结果。因此用网织红细胞绝对值表示,正常值5～15×1010/L。由于常规方法测定须先在体外经活体染色(最常用亚甲兰),然后在显微镜下计数,计数细胞数有限。用流式细胞仪测定网织红细胞具有以下优点:①可避免由于细胞核的碎片或铁幼粒细胞的颗粒的存在而出现假性网织红细胞升高.②可避免人为误差.③因为可在短时间内测量上万个细胞,结果较常规方法准确、可靠.④同时可给出网织红细胞年龄结构。流式细胞仪测定网织红细胞方法简单,只须将红细胞洗净后用荧光染料染色后即可上机检测。常用的荧光染料有焦宁Y(Pyronin?Y)?丫啶橙(Acridine?OrangeAO)?碘化丙啶(Propidium?Iodine?PI)?花青(?Cyanine?dye)等。第95页,共99页，星期六，2024年，5月细胞分选系统第96页,共99页，星期六，2024年，5月FluorescenceActivatedCellSorting488nmlaser+-ChargedPlatesSinglecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetector第97页,共99页，星期六，2024年，5月细胞分选第98页,共99页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第99页,共99页，星期六，2024年，5月**進入凋亡程序細胞的早期變化之一，是原本存在細胞膜內層之PhosphotidylSerine(PS)，會移位至細胞膜外層。以AnnexinV-FITC標示外露的PS，再合併以PI進行壞死細胞的染色，可區分三種細胞。凋亡細胞可被AnnexinV-FITC染成綠色，但對PI拒染;壞死的細胞則同時會染上AnnexinV-FITC與PI，因其細胞膜已破損;而無法染上AnnexinV-FITC或PI的則是活細胞。**尿