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水稻细菌性条斑病监测与检测技术规程

1范围

本标准规定了水稻细菌性条斑病的监测与检测技术方法。

本标准适用于水稻细菌性条斑病发生区及杂交水稻制种区。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.2-1995农作物种子检验规程扦样

GB8371-2009水稻种子产地检疫规程

GB/T28078-2011水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌检疫鉴定方法

NY/T2287-2012水稻细菌性条斑病菌检疫检测与鉴定方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

检疫性有害生物quarantinepest

对受其威胁的地区具有潜在的经济重要性，但未在该地区发生，或虽已发生但分布不广并进行官方防治的有害生物。

3.2

疫区epidemicarea

由官方划定已发现有检疫性有害生物危害并由官方控制的地区。

3.3

监测surveillance

对某种疫病的发生、流行、分布及相关因素进行系统的长时间的调查与检测，以掌握该疫病的发生发展趋势。

3.4

检测test

为确定是否存在有害生物或为鉴定有害生物种类而进行的，除目测以外的检查。

4监测与检测条件

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4.1主要试剂

磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钾（KH2PO4）、碘化钾（KI）、碘（I2）、氯化钾（KCl）、氢氧化钠（NaOH）、碳酸氢二钠（Na2HCO3）、氯化钠（NaCl）、叠氮化钠（NaN3）、氯化镁（MgCl2）、七水硫酸镁（MgSO4·7H2O）、对硝基苯磷酸二钠（PNPP）、草酸铵[(NH4)2C2O4]、顺丁烯二酸（C4H4O4）、十二烷基硫酸钠（SDS）、柠檬酸三钠、吐温-20、Tris碱、Tris-HCl、硼酸、结晶紫、番红、EDTA、无水乙醇、琼脂糖、DIGDNALabelingKit(Roche)、市售抗体、市售酶标抗体、脱脂奶粉、PCR试剂。监测和检测过程中所需溶液及培养基配方，参见附录A。除另有规定外，所用试剂均为分析纯或生化试剂。

4.2用具及仪器

采集夹、采集袋、标本夹、标本纸、剪刀、纸袋、放大镜、镊子、刀片、标签纸、超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、显微镜、低温冷冻高速离心机、酶标仪、电泳仪、常规PCR仪、凝胶成像系统、超纯水仪、移液器、GPS等。

5监测技术

5.1监测范围

重点监测杂交水稻制种基地、病害发生区、水稻种子调运过程。

5.2监测方法

5.2.1种子监测

5.2.1.1调运种子的监测

对调运种子，特别是从疫情发生区调往非疫区的杂交水稻种子，查阅调运种子的品种、产地、发病史、检疫等信息，按照GB/T3543.2-1995中5的要求进行抽样，对疑似带菌种子进行室内检测。

5.2.1.2市场销售种子的监测

对市场销售种子，特别是疫区市场销售种子，查阅种子生产流通信息及品种发病历史等信息，观察种子的外观，按照GB/T3543.2-1995中5的要求进行抽样，将样品进行室内检测。

5.2.2田间监测

5.2.2.1杂交水稻制种基地田间监测

秧田期踏查1次，拔节至抽穗期至少踏查2次，乳熟期踏查一次，特别是在台风暴雨前后要及时进行踏查。每个品种均要踏查，踏查面积占总面积的50%以上，踏查方法参照GB8371-2009中8.1的要求执行。调查过程中，发现具有水稻细菌性条斑病典型症状（见附录B），即可认定为水稻细菌性条斑病；对疑似症状的叶片，直接采样进行室内检验。

5.2.2.2疫区田间监测

根据种植地发病史和栽培品种发病史，选择有代表性的田块进行定期踏查。秧田期踏查1次，拔节至抽穗期至少踏查2次，特别是在台风暴雨前后要及时进行踏查。发现初始发病点后，要对该发明点附近田块和该区域（以县、区为单位）内感病品种进行普查。在调查过程中，发现具有水稻细菌性条斑病典型症状（见附录B），即可判定为水稻细菌性条斑病；对疑似症状的叶片，直接采样进行室内检验。

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5.2.2.3非疫区田间监测

选择区域内具有代表性的杂交水稻田块，秧田期踏查1次，拔节至抽穗期踏查2次。在调查过程中，发现具有水稻细菌性条斑病疑似症状叶片（见附录B），直接采样进行室内检验。对疑似发病地点周边田块和该区域（以县、区为单位）内种植该品种田块进行踏查，踏查面积占总面积的30%以上。

6检测技术

6.1样品处理

6.1.1种子样品处理

水稻种子样品的处理参照GB/T28078-2011中8.1的要求执行。