1.2发酵工程的无菌技术+第2课时+课件+高二下学期生物苏教版选择性必修3.pptx

第二节发酵工程的无菌技术第一章发酵工程第2课时

菌种是从事发酵工程实践及微生物学等学科研究的基本材料和重要资源。因此，菌种的传代和保存至关重要。菌种的传代和保存要考虑菌种的生理、生化特性，尽量让菌种在人工创造的条件下，降低细胞的代谢水平，使细胞基本处于休眠状态，即微生物的生长繁殖受到抑制但又不至于死亡。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物生长和代谢的作用。因此低温、干燥、真空是菌种保存的重要条件。厌氧微生物接触氧气会受到抑制、损伤甚至死亡，常采用穿刺接种的方法将其保护在培养基中。厌氧菌可在培养基深处的厌氧环境下生长。斜面接种是常用的菌种传代和低温下保存菌种的方法。情境导入

边做边学：斜面接种和培养酵母菌培养酵母菌准备接种接种环灭菌试管口灭菌挑取少许菌体划线接种

斜面接种和培养酵母菌的操作步骤及其目的或分析说明顺序接种操作步骤目的或分析说明①将接种环的环端和接种时可能进入试管的部分放在酒精灯火焰上，来回灼烧多次将接种环灭菌，避免污染菌种②迅速将试管口通过火焰2～3次灼烧灭菌，防止试管口上的微生物污染培养基③将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位使接种环冷却，避免杀死菌种边做边学：斜面接种和培养酵母菌

斜面接种和培养酵母菌的操作步骤及其目的或分析说明顺序接种操作步骤目的或分析说明④抽出接种环时，带菌部位不要触及管壁或通过火焰防止菌种沾于管壁；防止菌种被杀死⑤在培养基斜面上由底部向上轻轻划“Z”型折线，但不要将培养基的表面划破初步接种。划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准⑥将试管口与试管塞分别通过火焰2～3次，迅速塞紧试管防止杂菌污染⑦将接种过菌种的试管，放在恒温箱(28℃)中培养24h培养酵母菌，观察接种和培养的结果边做边学：斜面接种和培养酵母菌

边做边学：斜面接种和培养酵母菌讨论：1.培养24h后，能观察到的实验结果是什么？如何将酵母菌培养在平板培养基上？2.在上述接种和培养过程中，我们注意到了哪些灭菌操作注意事项？微生物的菌种保存一般需要先挑选典型菌落，再接种在斜面培养基上，按规定的温度和时间培养；待充分生长后，将培养好的装有新鲜菌种的试管用牛皮纸包扎好，置于4℃左右的冰箱中保藏，以减缓培养基的水分蒸发，延长保存时间。通常每隔2~3个月重新接种一次，再继续保存。

微生物分离、纯化和培养的无菌技术平板划线法是指把含有多种微生物的杂菌样品，通过在特定的琼脂平板表面划线稀释，从而获得单个菌落的方法。连续划线法分区划线法

通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落尝试通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。实验目的实验原理马铃薯葡萄糖琼脂培养基能满足酵母菌生长、繁殖的营养需要，利用前面实验中配制的马铃薯葡萄糖琼脂培养基制作平板。平板划线法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法之一。在制作好的酵母菌培养基平板上，采用无菌操作技术及平板划线法能够获得纯化的酵母菌菌落。

实验器材和试剂酵母菌样本（菌种），接种环，酒精灯，恒温培养箱，高压蒸汽灭菌锅，马铃薯葡萄糖琼脂培养基。通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

实验步骤1.培养基和培养皿灭菌通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落配制培养基：

实验步骤1.培养基和培养皿灭菌通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落灭菌：

通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落实验步骤2.倒平板注意待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置防止瓶口微生物污染培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染温度过高容易烫伤，低于50℃琼脂会凝固。避免杂菌污染。

实验步骤3.划线和培养参照图1-2-16，在平板上划线，然后置于28℃恒温培养箱。通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞③试管口通过火焰④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。

1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；2.划线首尾不能相接；3.每次划线前灼烧接种环进行灭菌；4.划线操作结束后，仍需灼烧接种环。接种环灭菌接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌12345通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在