肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会.ppt

速冻方法液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;01干冰-丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达-70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰-丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。02免疫组化染色后的衬染常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!!01细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚固绿(FASTBLUE)染,则保存时间较长02常见肝病的病理形态特点及免疫组化染色的几点体会复旦大学病理学系张锦生肉眼观察肝穿刺标本呈完整园柱状，长度1－3cm典型的慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观肝硬化的穿刺标本，呈不规则碎块石蜡切片每张玻片上应放置超过6个连续组织切片，有助于肝纤维化的病理诊断。染色除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件和需要作以下特殊染色：网状纤维染色，Masson三色染色，胶原纤维染色(Siriusred或免疫组化)α-SMADmS1S2S3S4活动性纤维间隔静止性纤维间隔小叶中央区纤维化窦周纤维化3.肝糖原累积病肝纤维4.Wilson病红氨酸(Rubeanicacid)染色,铜被染成深绿色肝细胞普鲁氏蓝染色阳性自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）门管区肝细胞呈花环状排列HepaticRosette，表现为数个水样变性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。原发性胆汁性肝硬化（PBC）3期（间隔期）90%出现自身抗体(A-Mit)，Floridductlesion+BiliaryPN，纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症活动–FibrousPN.8.血吸虫性肝纤维化肝癌(LIVERCANCER)HCC01ICC02Combinedhepatocellularandcholangiocarcinoma03HepPar1线粒体相关抗原，与AFP无关对胎儿和成人肝细胞高度特异(HCC:阳性率82-97%）AFPHCC阳性率：15-82%CD34:01HCC型染色长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.0112HCC,ICC,Metastaticcarcinoma:100%+上皮性肿瘤标志物12CK18:CK19:胆管型CK:CK19,CK7肝细胞－胆管上皮，ICC：77-100%ICC最好的标志物CEA：monoclonalCEA:毛细胆管－ICC，转移性肝癌：60-75%+HCC:0-11%+polyclonalCEA:毛细胆管＋HCC特异标志物之一CK20:胃肠道腺癌的主要标志物转移性腺癌：74-100%+ICC:10%+HCC:0%+MOC31:抗人上皮相关抗原转移性腺癌：100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝转移HBsAg:HCC:70-80%+胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性黏液染色：AB/PAS酸性黏多糖：兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液）中性黏多糖,糖原：红色（假腺管型HCC)组织和细胞标本制备目的：最大限度地保存组织结构。最大限度地保存抗原性。注意事项：在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)。1.取材01原则：尽可能新鲜，动物标本可选02用动脉灌注固定。03取材部位：尽量包括病灶和正常组04织交界处，避免选择坏死组织。05避免挤压：受挤压组织不但影响06HE切片的观察，还造成非特异性07免疫组化组织着色。2.固定根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要合适。1容器要大,固定液要宽余.2固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴.3选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林4冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采用低温石蜡包埋,如无低温石蜡,可将组织块尽可能修薄,以缩短脱水、透明、包埋时间,尽可能保存组织内抗原稳定。4.制备冰冻切片冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适合