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基因工程抗体概述和基本技术

(GeneticEngineeringAntibody)

一、概述

以生物高技术为手段，将动物淋巴细胞产生的抗体基因，人为地使其在非淋巴细胞中表

达，所产生的抗体称基因工程抗体。产生抗体的基因工程是建立在单克隆抗体(McAb)技术之

上的，如果说后者是生物科学的一场革命，那么抗体的基因工程技术无疑是这场革命的拓宽

和延续。

1975年，Khler和Milstein等创立的B淋巴细胞杂交瘤技术给抗体技术的深入研究及

应用带来了突破，单克隆抗体作为临床诊断、治疗、预防及基础理论研究的新型制剂，已日

益显示出重要的作用和广阔的应用前景，尤其是McAb或“McAb复合物”对临床某些疾病如

肿瘤的治疗作用更引人注意。将McAb与化疗药物、毒素或同位素等连接后，借助McAb的特

异性识别，可有效地将治疗性药物运送到靶细胞，这种称为魔弹(magicbullets)的导向药

物疗法的出现，曾令人们兴奋不已，以为找到了攻克癌症的尖端武器。尽管这一技术有许多

不可比拟的优点，随着研究的深入，也暴露出许多问题，其中最主要的就是难以获得大批量

的人类杂交瘤抗体，致使用于临床治疗的McAb绝大多数都来源于小鼠和大鼠。由于人和鼠

之间遗传背景的差异，在人体内使用鼠源McAb，会被作为外源性蛋白抗原而产生人抗鼠抗

体(humananti-murineantibodies,HAMA)，这种抗体会被迅速清除，如由静脉注入人血液

中的小鼠单抗，会妨碍小鼠McAb与抗原或靶细胞的结合，从而降低McAb的治疗效应，更为

重要的是HAMA可在人体内与小鼠McAb结合，可产生类似血清病的超敏反应，因而限制了鼠

源McAb在临床上的反复使用。最好的办法是应用人源性单抗。但人-人杂交瘤技术尚未出现

重大的突破，存在着建株困难、Ig产量太低、稳定性和亲和力差，以及本身还分泌一些杂

蛋白等问题。

基因工程抗体技术依赖于两个基础：一是抗体的结构功能关系以及抗体多样性的遗传

机制，二是分子生物学技术进展，特别是PCR技术，为基因片段的大量扩增提供了简单有效

的途径。基因工程抗体技术的基本原理是，首先从杂交瘤细胞、免疫脾细胞或外周血淋巴细

胞中提纯mRNA，逆转录为cDNA，再经PCR分别扩增抗体的重链和轻链可变区编码基因，经

适当方式将二者连接形成单链抗体可变区基因片段(single-chainvariablefragments,

ScFv)，在一定的表达系统中得以表达。另外，重链和轻链可变区基因还能在同一宿主的两

个载体中分别表达，然后在胞浆内组装成单链抗体可变区片段(ScFv)，或二价抗体片段。这

种单链抗体在其N末端或C末端可进一步与毒素、葡萄球菌蛋白A、碱性磷酸酶、T细胞受

体及单链抗体片段本身融合，这些蛋白质既有抗原结合能力，又有其融合蛋白的生物活性，

因此这类蛋白被称为“双功能抗体”。

二、抗体的基因结构

抗体是由二硫键相连的两条轻链(L链)和两条重链(H链)构成的活性多肽蛋白分子。具

有两个功能区：一为特异性结合抗原区，位于抗体L、H链的可变区(V区)，一为稳定区(C

区)。免疫球蛋白的轻链和重链是由两个不同类型的基因分别编码的，属于多基因家族。Ig

的V基因和C基因均由多个外显子组成，Ig分子的每一个多肽区由不同的外显子编码，尤

其是重链基因，有多个外显子供选择，这也是抗体形成多样性的物质基础，如编码Ig重链

VH的基因有多个基因片段(VH～VHn)供选择，与VH基因连接的还有多样性基因节段(DHa～

1

DHx)，连接链基因片段(JH～JH)和决定重链种类的恒定区基因片段(C～C)。这些基因在

16µε

DNA水平上切断、重组，在RNA水平上拼接，根据与哪一类C基因片段连接，即组成哪一类

Ig，Tonegawa(1976)和E