- 1、本文档共10页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
476体外哺乳动物细胞基因突变试验
(InvitroMammalianCellGeneMutationTest)
1受试物必备
化学鉴定
纯度(杂质)
溶解度
熔点、沸点
pH(必要时)
2试验目的
2.1目的与意义
体外哺乳动物细胞基因突变试验可用于检测由化学物质诱导的基因突变。适用
的细胞系包括L5178Y小鼠淋巴瘤细胞、中国地鼠CHO、AS52和V79细胞系、TK6
淋巴样母细胞。在这些细胞系,最常用的遗传学终点是检测胸苷激酶(TK)突变、次
黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(HPRT)突变、黄嘌呤转磷酸核糖基酶(XPRT)基因突
变。TK、HPRT和XPRT突变试验检测不同的遗传事件谱。TK和XPRT位于常染色
体,可检测HPRT(位于X染色体)不能检测的遗传学事件(如大缺失)。
2.2定义
正向突变(forwardmutation):从原型基因突变为突变体,引起酶活性或编码
蛋白功能丧失。
碱基置换型致突变物(basepairsubstitutionmutagens):引起DNA分子中一
个或几个碱基对置换的化学物。
移码型致突变物(frameshiftmutagens):引起DNA分子中增加或丢失一个或多
个碱基对置换的化学物。
表型表达时间(phenotypicexpressiontime):在新突变的细胞耗尽未改变的
基因产物所需的时间。
突变体频率(mutantfrequency):观察到的突变细胞数除以存活细胞数。
相对总生长(relativetotalgrowth):经过整个时期与阴性对照细胞群比较的
细胞数增加,计算为相对于阴性对照的悬浮生长与相对于阴性对照的集落形成效率
的乘积。
相对悬浮生长(relativesuspensiongrowth):经过表达期相对于阴性对照的
细胞数增加。
表达存活率(viability):在表达期后接种选择培养基时的处理细胞的集落形成
效率。
处理存活率(survival):在处理期末,处理细胞的集落形成效率。通常表达为
对照细胞群存活率的相对数。
3试验原理
体外哺乳动物细胞基因突变试验是利用培养的哺乳动物细胞作指示生物的体外
遗传毒理学试验,遗传学终点为细胞基因突变。,,,,//由于TK突变成TK,引起
细胞缺乏胸苷激酶(TK),细胞对嘧啶同型物三氟胸腺,,/嘧啶(TFT)的细胞毒作用
具有耐受性。TK细胞对TFT敏感,TFT引起细胞代谢抑制和,,,,//细胞分裂停
止,而突变细胞在TFT存在时能增殖,故TFT可作为TK细胞和TK细胞的选择剂。
与此相似,HPRT或XPRT未突变的细胞对6-硫代鸟嘌呤(TG)或8-氮杂鸟嘌呤(AG)
敏感。当试验与选择剂结构相关的化学物时,必须证实选择系统/选择剂的可行
性。
在有和无代谢活化的条件下,悬浮细胞或单层细胞培养物暴露于受试物适当时
间,传
-1-
代测定细胞毒性和进行表型表达,再进行突变体选择。细胞毒性测定通常利用
经染毒后培养物的相对集落效率(染毒存活率)或相对生长。经染毒的培养物在培养
液中培养一定时间,以允许诱发的突变体表型表达。在含选择培养液中接种已知数
量的细胞,来测定突变体集落数,并在无选择剂的培养液中测定集落生成效率(表
达存活率)。经适当的培养时间,计数集落。突变体频率是在选择培养液中突变体
集落数除以在无选择剂培养液中集落数。
4操作方法和程序
4.1准备
4.1.1细胞
(1)多种细胞可用于本试验,包括L5178Y、CHO、CHO-AS52、V79或TK6细胞。
本试验所用的细胞类型应该证实对化学致突变物敏感,集落形成效率高和自发突变
频率稳定。应核实细胞无支原体污染,如有污染,则不应使用。
(2)试验设计应达到预先确定的敏感性和把握度。细胞数、培养物和受试物浓
度应反映这些已确定的参数,在试验每个阶段所用的最低存活细胞数应该根据自发
突变频率确定,6所用的的细胞数一般至少为自发突变频率倒数的10倍,推荐至
少利用10细胞。应该有所用细胞系统的本底资料提示此试验系统的稳定性。
4.1.2培
您可能关注的文档
- 2022临时工合同模板.pdf
- 2021-2022学年度沪教版(上海)八年级数学第二学期第二十三章概率初步综合练习试卷(精选含答案).pdf
- 2022年温州市苍南县图书馆招聘试题及答案解析.pdf
- 2022年辽宁省大连市中考数学试卷及答案解析.pdf
- 2022年人教版九年级语文上册期中考试卷及答案【全面】.pdf
- 360度绩效考评4个维度优缺点解析总结报告.pdf
- 2022年北京市西城区高考数学一模试卷(解析版).pdf
- 051005[土木工程材料] 天津大学考试题库及答案.pdf
- 2023年-2024年消防设施操作员之消防设备初级技能题库练习试卷B卷附答案.pdf
- 2022年福建省南平市小升初初数学模拟试卷及答案解析.pdf
- 2025年呼和浩特职业学院单招语文测试题库完整.docx
- 2025年湖南省洪江市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验重点难点精练试题必考题.docx
- 2025年吉林省临江市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验重点难点精练试题附答案.docx
- 2025年吉林省双辽市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验知识点试题必考题.docx
- 2025年吉林省集安市职业能力倾向测验事业单位考试(中小学教师类D类)试题及参考答案.docx
- 2025年贵州省赤水市事业单位公开招聘考试职业能力倾向测验(D类)(中小学教师类)真题含答案.docx
- 2025年湖北省赤壁市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验知识点试题必考题.docx
- 2025年黑龙江省绥芬河市事业单位公开招聘考试职业能力倾向测验(D类)(中小学教师类)真题一套.docx
- 2025年黑龙江省五大连池市事业单位考试职业能力倾向测验(中小学教师类D类)强化训练题库新版.docx
- 2025年江西省瑞昌市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验试卷汇编.docx
最近下载
- 六年级数学《圆的对称性》C1跨学科学习活动设计学习活动方案学生成果及点评.pdf VIP
- 高低压变配电工程施工招标文件.pdf VIP
- 变电站施工合同协议书范本.docx
- 《分级护理制度》课件.ppt VIP
- 2024年检验类之临床医学检验技术(士)真题精选附答案 .pdf VIP
- J B∕T 13202.4-2017 -柴油机 颗粒捕集系统 第4部分:颗粒捕集器技术条件.pdf
- 2.蜗牛的坚持 课件(共19张PPT内嵌视频) 人教版一年级美术上册02.ppt.pptx VIP
- 软科2024年中国大学排名 .pdf VIP
- DB37_T 5174-2021 山东省沿海地区建筑工程风压标准.docx
- 小学跨学科教学的评价与反馈.docx
文档评论(0)