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476体外哺乳动物细胞基因突变试验

(InvitroMammalianCellGeneMutationTest)

1受试物必备

化学鉴定

纯度(杂质)

溶解度

熔点、沸点

pH(必要时)

2试验目的

2.1目的与意义

体外哺乳动物细胞基因突变试验可用于检测由化学物质诱导的基因突变。适用

的细胞系包括L5178Y小鼠淋巴瘤细胞、中国地鼠CHO、AS52和V79细胞系、TK6

淋巴样母细胞。在这些细胞系，最常用的遗传学终点是检测胸苷激酶(TK)突变、次

黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶(HPRT)突变、黄嘌呤转磷酸核糖基酶(XPRT)基因突

变。TK、HPRT和XPRT突变试验检测不同的遗传事件谱。TK和XPRT位于常染色

体，可检测HPRT(位于X染色体)不能检测的遗传学事件(如大缺失)。

2.2定义

正向突变(forwardmutation):从原型基因突变为突变体，引起酶活性或编码

蛋白功能丧失。

碱基置换型致突变物(basepairsubstitutionmutagens):引起DNA分子中一

个或几个碱基对置换的化学物。

移码型致突变物(frameshiftmutagens):引起DNA分子中增加或丢失一个或多

个碱基对置换的化学物。

表型表达时间(phenotypicexpressiontime):在新突变的细胞耗尽未改变的

基因产物所需的时间。

突变体频率(mutantfrequency):观察到的突变细胞数除以存活细胞数。

相对总生长(relativetotalgrowth):经过整个时期与阴性对照细胞群比较的

细胞数增加，计算为相对于阴性对照的悬浮生长与相对于阴性对照的集落形成效率

的乘积。

相对悬浮生长(relativesuspensiongrowth):经过表达期相对于阴性对照的

细胞数增加。

表达存活率(viability):在表达期后接种选择培养基时的处理细胞的集落形成

效率。

处理存活率(survival):在处理期末，处理细胞的集落形成效率。通常表达为

对照细胞群存活率的相对数。

3试验原理

体外哺乳动物细胞基因突变试验是利用培养的哺乳动物细胞作指示生物的体外

遗传毒理学试验，遗传学终点为细胞基因突变。，,,,//由于TK突变成TK，引起

细胞缺乏胸苷激酶(TK)，细胞对嘧啶同型物三氟胸腺，,/嘧啶(TFT)的细胞毒作用

具有耐受性。TK细胞对TFT敏感，TFT引起细胞代谢抑制和，,,,//细胞分裂停

止，而突变细胞在TFT存在时能增殖，故TFT可作为TK细胞和TK细胞的选择剂。

与此相似，HPRT或XPRT未突变的细胞对6-硫代鸟嘌呤(TG)或8-氮杂鸟嘌呤(AG)

敏感。当试验与选择剂结构相关的化学物时，必须证实选择系统/选择剂的可行

性。

在有和无代谢活化的条件下，悬浮细胞或单层细胞培养物暴露于受试物适当时

间，传

-1-

代测定细胞毒性和进行表型表达，再进行突变体选择。细胞毒性测定通常利用

经染毒后培养物的相对集落效率(染毒存活率)或相对生长。经染毒的培养物在培养

液中培养一定时间，以允许诱发的突变体表型表达。在含选择培养液中接种已知数

量的细胞，来测定突变体集落数，并在无选择剂的培养液中测定集落生成效率(表

达存活率)。经适当的培养时间，计数集落。突变体频率是在选择培养液中突变体

集落数除以在无选择剂培养液中集落数。

4操作方法和程序

4.1准备

4.1.1细胞

(1)多种细胞可用于本试验，包括L5178Y、CHO、CHO-AS52、V79或TK6细胞。

本试验所用的细胞类型应该证实对化学致突变物敏感，集落形成效率高和自发突变

频率稳定。应核实细胞无支原体污染，如有污染，则不应使用。

(2)试验设计应达到预先确定的敏感性和把握度。细胞数、培养物和受试物浓

度应反映这些已确定的参数，在试验每个阶段所用的最低存活细胞数应该根据自发

突变频率确定，6所用的的细胞数一般至少为自发突变频率倒数的10倍，推荐至

少利用10细胞。应该有所用细胞系统的本底资料提示此试验系统的稳定性。

4.1.2培