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实训十二奶粉中三聚氰胺的测定

【背景知识】

三聚氰胺简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，分子式：C3N6H6、

C3N3(NH2)3，在水中的溶解度非常低，尤其是常温和冷水状况下，溶解于水中的三聚氰胺很

快结晶出来，这也是三聚氰胺生产中通过急冷方式分离三聚氰胺的工作原理。三聚氰胺是一

种白色结晶粉末，没有什么气味和味道，掺杂后不易被发现，常被不法商人用作食品添加剂，

以冒充食品中的蛋白质，因此三聚氰胺也被人称为“蛋白精”，三聚氰胺本身毒性较小，

1994年国际化学品安全规划署和欧洲联盟委员会合编的《国际化学品安全手册》第三卷和

国际化学品安全卡片说明：长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产

生结石。当混在奶粉中的这种网格结构被摄入人体后，在胃液的酸性作用下，三聚氰胺和三

聚氰酸相互解离，分别被吸收入血液当中。由于人体无法转化这两种物质，三聚氰胺和三聚

氰酸被血液运送到肾脏，在肾脏细胞中，两种物质再次相互作用，以网格结构重新形成不溶

于水的大分子复合物，并沉积下来，形成结石，结果造成肾小管的物理阻塞，导致尿液无法

顺利排除，使肾脏积水，最终导致肾脏衰竭。

目前三聚氰胺的检测方法分为浊度法（GB9567-1997,目测或浊度计，、升华法、重量

法（GB9567-1988）、0.5mol/L硫酸电位滴定法、HPLC。不同的测定方法采用不同的三聚

氰胺提取方法和使用不同的样品量，本实验重点介绍高效液相色谱法。

一、实训目标

1、了解奶粉中三聚氰胺含量的测定原理

2、进一步掌握高效液相色谱仪使用方法，熟悉紫外检测器的使用

二、实训原理

三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，微溶于水，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热

乙二醇、甘油、吡啶等。本方法采用20%甲醇溶解样品，5%三氯乙酸沉淀蛋白，提取样品中

的三聚氰胺，经液相色谱仪C柱分离，检测波长235nm条件下进行检测。

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三、仪器和试剂

使用优级纯、色谱纯试剂，色谱用水符合GB/T6682一级水的规定。

1、试剂：

①20%甲醇溶液：甲醇+水(2+8)

②5%三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸5g溶解于100mL水中。

③乙腈

④混合液：称取2.10g一水合柠檬酸和1.88g己烷磺酸钠，溶于水中，稀释至1000mL

混匀。

⑤流动相：混合液（2.4）+乙腈（2.3）92+8。

⑥标准储备液配制：准确称取三聚氰胺标准品0.1000g，用20%甲醇溶液（2.1）定容至

100mL。三聚氰胺含量为1.00mg/mL，于4℃冰箱内避光保存。

⑦三聚氰胺标准系列的配制：准确吸取标准储备液(2.6)0.100mL；1.00mL；2.50mL；

5.00mL；10.00mL至100mL容量瓶中，并用20%甲醇溶液（2.1）定容至刻度。配制成

三聚氰胺浓度分别为1.00mg/L；10.0mg/L；25.0mg/L；50.0mg/L；100mg/L的标准系列。

2、仪器和设备

①液相色谱仪：附二级管阵列检测器（DAD）或紫外检测器（UV）

②超声波清洗器

③超速离心机

④涡旋混合器

⑤滤膜：0.45μm

四、操作步骤

1、试样处理：将奶粉样品混匀，准确称取样品1～5g于50mL比色管中，加入20%甲醇

溶液（2.1）约35mL，震荡混匀，超声提取5min，加入5%三氯乙酸(2.2)5mL，并用20%

甲醇溶液(2.1)定容至刻度，摇匀。以3000rpm/min超速离心5min。取上清液经0.45μm

滤膜过滤，备用。

2、色谱参考条件

①流动相：10mmol/L己烷磺酸钠+10mmol/L柠檬酸∶乙腈92∶8；

②流速:1.0ml/min；

③柱温：35℃；

④检测器：二极管阵列检测器（DAD）或紫外检测器（UV），波长235nm；

⑤色谱柱：C柱子250mm×4.6mm，5μm；

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⑥进样量：10～20μL

3、色谱分析：进样10～20μL标准使用液及样品处理液于高效液相色谱仪中，以保留时

间及光谱定性，以样品峰面积与标准系列比较定量。

4、结果计算

样品中三聚氰胺含量按下列公式进行计算。

cV1000